由于银染的灵敏度高,各大公司均生产银染试剂盒。 银染的机制是将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,以使银颗粒沉积在蛋白带上。用银染蛋白的吸光度对它们的浓度作图呈现不同的斜率,表明染色的程度是与蛋白中的一些特殊基团有关。研究还表明喊性和含硫氨基酸在银染...
SDS-PAGE考马斯亮蓝-银染色将凝胶泡在至少5倍体积的固定液中室温下412h去掉固定液将胶泡在至少5倍体积的30乙醇中室温30minshaking并重复1次1h弃去乙醇加入10倍体积的去离子水室温10min重复1次20min弃去水加入5倍体积硝酸银溶液室温30min弃去硝酸银溶液去离子水漂洗凝胶2面各20s不可让胶脱水倍体积显影液数分钟内...
6. 重复步骤5两次; 7. 弃去清洗用水,加5倍体积的硝酸银溶液,室温下平缓摇动30 min; 8. 弃去硝酸银溶液,用纯水(去离子水)漂洗凝胶两面,每面20 s; 9. 加5倍体积的新鲜显影液,室温下平缓摇动,数分钟内出现蛋白质的染色条带,继续至条带清晰; 10. 用1%乙酸清洗凝胶终止反应,再用纯水(去离子水)水漂洗数次...
一、SDS-PAGE的基本原理 （一）蛋白质分子的解聚样品介质和聚丙烯酰胺中加入离子 去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，而电荷因素可以被忽略 专业课件 3 1、SDS 阴离子去污剂变性剂助溶性试剂 断裂分子内和分子间的氢键分子去折叠破坏蛋白质分子的二级和三级结构 专业课件 4 2...
↓ 水洗２*１０min ↓ 银染20min，避光染的[共100ml，甲醛40ul，AgNO3终浓度0.25%，两者现用现混合...
2)银染:将凝胶置硝酸银溶液中浸泡15分钟,弃去硝酸银溶液,再用水洗3次,每次15分钟(注意清洗时必须防止凝胶表面干涸,否则会出现人为染色假象)。 3)显色:将凝胶置显色液中,平缓摇动5分钟左右(时间过长会导致凝胶出现较高的银染背景),待蛋白质条带显色后,置10% 乙酸中数分钟停止染色。用水洗3次,每次10分钟。
用的菌液总单蛋白,考马斯亮蓝人染色几乎没有条带,所以就用了硝酸银染色,结果根本不成条带,完全是成弥散状的,整个泳道都是黑的,同时跑的Marker很正常,考马斯亮蓝染色的条带清晰。我用这个总蛋白过完DEAE柱子后,因为蛋白含量很低,所以只能用硝酸银染色,染色后的条带
采用0.1 M HAc-NaAc缓冲液(pH 4.3)、0.1 M Tris-HCl缓冲液(pH 8.6)、ddH2O和40%乙醇提取滇产、川产僵蚕蛋白质,加入SDS-PAGE蛋白加样缓冲液(5×)并进行SDS-PAGE分析,结果表明,当蛋白质加样量为20μg,凝胶浓度为14%时,僵蚕蛋白质指纹图谱达到最佳分辨率。硝酸银染色法较考马斯亮蓝法灵敏度更高,而Tricine...
(2)用于SDS-PAGE凝胶的电泳:1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液; (3)用于SDS-PAGE凝胶的考马斯亮蓝染色:甲醇,乙酸,考马斯亮蓝; (4)用于SDS-PAGE凝胶的硝酸银染色:乙醇,乙酸,乙酸钠,25%戊二醛,硫代硫酸钠,,硝酸银,甲醛,碳酸钠,EDTA-Na22H2O。 3、要紧仪器 玻璃制胶板,垂直电泳槽,电泳仪,染色与脱色摇床,凝胶成像系...
在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中,常用考马斯亮蓝或硝酸银给凝胶中的蛋白质条带染色,这两种方法是当前电泳染色中的主要方法,应用广泛.最近几年,又出现了新的染色方法—曙红Y染色法和尼罗红染色法.四种染色法各有特点.现把四种染色法介绍如下,以供同行们染色时参考与选择.1 考马斯亮蓝染色法考马斯亮蓝染色...