电泳装置 电泳仪与电源 考马斯亮蓝染色液(或其他染色液) 实验步骤 一、制备SDS-PAGE凝胶 准备分离胶和浓缩胶按照不同的蛋白质大小,选择合适的分离胶浓度(常见为10-15%)。具体配方如下:分离胶(Resolving Gel)配方: 水 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(Acrylamide-Bis solution) 1.5 M Tris-HCl (pH 8.8) 10% SD...
电泳缓冲液加满,进行电泳 三、电泳 注意正负极的连接,可以采用80V的电泳 观察到经过一段时间的电泳,蛋白的样品已经跑到了浓缩胶与分离胶的界面上。这个时候电压改成110V,继续电泳,直至条带跑到电泳板的底部 四:染色与脱色 凝胶放在染色液中染色,该步骤在摇匀板上完成 转到脱色液中,脱色4-6小时,或者过夜,脱色液要...
实验用品（溶液配制说明详见文章下方）蛋白样品，SDS-PAGE loading buffer，PBS，Tris-Hcl (PH 8.8)， Tris-Hcl (PH 6.8) ，30%丙烯酰胺，10%SDS，10%过硫酸，5×SDS-PAGE电泳缓冲液，考马斯亮蓝R-250染色液，脱色液。实验步骤一、凝胶配置1．分离胶的配制（1）找出配套的胶板，用擦镜纸擦干净，并固定...
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是最常用的定性分析蛋白质的电泳方法,特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量。 SDS-PAGE -巯基乙醇的样品处理液,SDS即十二烷基磺酸钠(CH3-(CH2)10-CH2OSO3-是在要走电泳的样品中加入含有SDS和 -巯基乙醇可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质的四级结构。电泳样品加入样品处理...
染色完成后,回收染色液,用纯净水冲洗凝胶2-3次,然后放入脱色槽中,加入脱色液进行脱色,直到没有背景色为止。 Tips:脱色时可以在脱色槽侧面放一块吸水纸,脱色更干净。 如果着急看结果,可以适当加热后脱色,十分钟出结果。 9照胶和分析 SDS-PAGE电泳结果
SDSPAGE所有详细试剂配方 SDS-(聚丙烯酰胺凝胶电泳)是一种常用于蛋白质分析的实验技术。该技术通常涉及到几种试剂,如胶溶液、缓冲液、电泳缓冲液、染色溶液等。下面是SDS-常见的试剂配方及其详细说明。 一、胶溶液配方: 1. 30%(w/v)丙烯酰胺(acrylamide)溶液 - 在称量瓶中称取30g丙烯酰胺,并用蒸馏水调至100ml...
今天去听了导师给研究生带的高级生物化学实验课,学习了SDS-PAGE电泳的一整套操作,简单总结一下。 制板 检漏 制胶 (1) 制备10%的分离胶(梳子插进去 往下1cm,划线) (2)加1ml蒸馏水(液面压平,排气泡) (3) 制备5%的浓缩胶 样品处理 点样 电泳
SDS-PAGE电泳相关溶液的配置5将凝胶小心取下放入容器中加入染色液用摇床摇23h6待条带清晰后倒出染色液加入脱色液过夜7将脱色液倒掉在灯箱下观察8用数码相机拍照分析 电泳相关溶液的配置: 1、30%丙稀酰胺混合溶液(100ml):称取29g丙稀酰胺和1gbis丙稀酰胺,用水溶解定容到100ml,过滤,4摄氏度保存一个月。 2、5×...
漂洗过程推荐用大号的1ml枪头盒,使凝胶能充分振荡起来。染色推荐用小号的1ml枪头盒。 一个盒子可同时放入2块胶进行漂洗和染色(请勿过多,会影响效果),漂洗的去离子水和染色液加倍。 染色液于室温避光,可保存一年。 染色液通常不建议回收使用,染色效果会变差,如有必要最多重复使用1次,回收的染液请保存在棕色瓶内...
蛋白凝胶可以快速进行染色,灵敏度高,无需复杂脱色步骤。染色液可以回收使用,也更经济环保。 操作也变得相当简单,无需加热,无需复杂的脱色过程,下面简简单单几步就可完成 1. SDS-PAGE电泳完成后,取出凝胶,去离子水漂洗1次。 2. 取出凝胶到合适的塑料盒中,加入染色液浸没凝胶,室温摇床上染色30min。 3. 观察染色...