SDS-PAGE,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是一种可以根据蛋白质的分子量分离样本中蛋白质的技术。 2. 原理 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N,N'-亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂过硫酸铵(APS),N,N,N',N’-四甲基乙二胺(TEMED)作用下,聚合交联形成的具有网状立体结构的凝胶,并以此为支...
SDS-PAGE电泳相关溶液的配置5将凝胶小心取下放入容器中加入染色液用摇床摇23h6待条带清晰后倒出染色液加入脱色液过夜7将脱色液倒掉在灯箱下观察8用数码相机拍照分析 电泳相关溶液的配置: 1、30%丙稀酰胺混合溶液(100ml):称取29g丙稀酰胺和1gbis丙稀酰胺,用水溶解定容到100ml,过滤,4摄氏度保存一个月。 2、5×...
把胶板从电泳仪上卸下，用刀片把胶板撬开，胶的浓缩胶部分割除；5、染色：放入考马斯亮蓝R-250染色液中进行常温过夜染色；5、脱色：将过夜染色的SDS-PAGE胶放入脱色液中进行脱色，直到背景发白。相关试剂配置说明一、3×SDS-PAGE loading buffer的配制1、将除BPB以外的药品完全溶解。SDS常温下很难溶解，可以在37...
蛋白质印迹法是一种广泛使用的方法,用于检测复杂基质中的特定蛋白质,例如细胞或组织裂解物(即蛋白质提取物)。蛋白质印迹分析使用凝胶电泳(SDS-PAGE 或天然 PAGE)根据分子量分离蛋白质。 蛋白质印迹允许将凝胶(SDS-PAGE)上分离的蛋白质转移到粘性膜上。电流、带负电荷的蛋白质和支持试剂(如滤纸、转移缓冲液和硝酸纤...
今天去听了导师给研究生带的高级生物化学实验课,学习了SDS-PAGE电泳的一整套操作,简单总结一下。 制板 检漏 制胶 (1) 制备10%的分离胶(梳子插进去 往下1cm,划线) (2)加1ml蒸馏水(液面压平,排气泡) (3) 制备5%的浓缩胶 样品处理 点样 电泳
三、电泳 注意正负极的连接,可以采用80V的电泳 观察到经过一段时间的电泳,蛋白的样品已经跑到了浓缩胶与分离胶的界面上。这个时候电压改成110V,继续电泳,直至条带跑到电泳板的底部 四:染色与脱色 凝胶放在染色液中染色,该步骤在摇匀板上完成 转到脱色液中,脱色4-6小时,或者过夜,脱色液要换3-4次 ...
由于赶时间，所以在胶跑完后放在了60都的烘箱里面，大概放了1.5-2小时的时间，然后拿出来加脱色液，...
找个大点的漏斗, 垫上滤纸, 装上活性炭, 脱色液倒上, 过滤。 又是澄清的脱色液了。 2、 完全不用脱色液, 热水脱色法。 电泳胶考染后, 用水漂洗一下, 然后泡在水中, 微波炉加热至沸腾,转小火, 维持沸腾状态 1 0min。 再换一次水, 加热 3-5min, OK。
【专利摘要】本发明公开了一种SDS-PAGE电泳凝胶脱色液的配方及快速脱色的方法,配方为:250ml乙醇,75ml冰乙酸,纯水定容到1000ml。方法为:取适量上述脱色液,将胶浸没后,在微波炉内低火模式下加热1min,再静置15min后,更换脱色液,重复以上步骤两次就可以完成脱色,整个脱色时间1h内就可以完成。新的脱色液配方降低了乙醇...
染色后，还需要脱色液（有乙醇、醋酸）脱色，不脱色的话全是蓝色，不能区分条带。脱色后，条带才能显示出来。在跑SDS-PAGE时，需要点Marker，正常情况在染色、脱色后能至少看到Marker的条带。如果Marker都没有，那就是电泳问题了。蛋白浓度不够、跑胶的时间过长或过短、仪器问题、正负极不要插反。