5. 条带不整齐 处理方法:可能是由于胶凝固不均匀,建议待胶完全凝固后上样;可能是由于电泳的时候,有气泡在胶的下边缘,建议电泳前,检查并赶走胶底部的气泡;可能是由于上样buffer不是工作液浓度,建议重新配置上样buffer;可能是由于拔梳子导致样品孔不齐,建议水平缓慢的拔梳子。 6. 无条带 处理方法:可能是转膜失败...
1、免疫球蛋白可能过度表达，导致分子量大于正常。2、免疫球蛋白可能有多个亚基结构，导致分子量偏大。3、免疫球蛋白的抗原可能太小，导致分子量偏大。sdspage是聚丙烯酰胺凝胶电泳，PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术，用于分离蛋白质和寡核苷酸。
SDS-PAGE电泳常见问题及解决方案问题原因解决方案①出现“微笑”形带(两边翘起中间凹下)由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致,多出现于较厚的凝胶中待其充分凝固再作后续实验②出现“皱眉”形带(两边向下中间鼓起)主要出现在蛋白质垂直电泳槽中,一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净可在两板间加入适量缓冲液,以排除气...
①出现“微笑”形带(两边翘起中间凹下) 由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致,多出现于较厚的凝胶中 待其充分凝固再作后续实验 ②出现“皱眉”形带(两边向下中间鼓起) 主要出现在蛋白质垂直电泳槽中,一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净 可在两板间加入适量缓冲液,以排除气泡 ③带出现拖尾 样品融解效果不佳或分...
上样缓冲液的作用:形成sds-蛋白复合物,使其带负电;sds和巯基乙醇使蛋白质解离,综上两点为了在电泳中,只根据分子量来分离。 sds促进作用:回去蛋白质电荷、离解蛋白质之间的氢键、中止蛋白分子内的亲水性促进作用、回去多肽卷曲,除了并助溶剂的促进作用。 2.sds-page电泳凝胶中各主要成分的作用 (1)铀与拆分胶凝结...
1. SDS-PAGE胶蛋白电泳后,部分条带上下粗细不均,出现上粗下细的现象,见下图箭头所指。 2. 转膜后,PVDF膜上出现大量象食盐一样的细小颗粒(决非气泡),照片照得不是太好,显得颗粒过大,实际上就象一颗一颗的细盐颗粒密集分布。 不知大家如何解决这两个问题的,谢谢!
对于蛋白纯化中SDS-PAGE跑胶问题,小编是有发言权的。对于当时还是蛋白纯化小白的小编来说,这个 “坑”反复跳了半学期才逐渐发现问题(哭死~)。为什么这么久才发现,一方面自己做实验反应较迟钝,另一方面网上也没有一个说明白的,只能从网络夹缝中查到那么一点点看上去合理的信息。那么,话不多说,上干货。
上样量有点大了
与麦芽糖结合蛋白融合后,跑SDS-PAGE没有条带 已经有8人回复 SDS-PAGE样品压不成一条线,Mark也少了一条带怎么回事? 已经有4人回复 跑SDS-PAGE时 maker条带还不错可是蛋白条带特别浅 求指点 已经有19人回复 sds-page 凝胶电泳求助 只有marker条带是清晰的,但宽窄不一 已经有18人回复 蛋白SDS-PAGE 下面 老...
【求助】毕赤酵母表达后跑SDS-PAGE出现奇怪的条带 我用毕赤酵母X-33表达大小约为66KD的糖化酶,诱导7天后,将上清经过TCA浓缩后跑SDS-PAGE,在预期的位置没有出现目的条带,但在大约100多KD处却出现了一条比较浓的带,量也较大,并且空白对照没有此条带。因为怀疑是由于二硫键形成的二聚体,所以我又用巯基乙醇将...