WB实验过程中包括SDS PAGE。western过程是先制备样品,再SDS PAGE跑电泳,然后孵育抗体,最后显影。
SDS-PAGE 的图是依据蛋白质分子量的大小进行区分的蛋白质电泳结果,图中自上而下依据蛋白分子量大小分布着不同大小的蛋白分子条带(但如果是特殊情况,如:纯化后的蛋白,就可能只有一条或少数几条带),并且如果是彩色图片的话可以看到染料的颜色(如:考马斯亮蓝R-250的蓝色),一般SDS-PAGE 的图给出...
前一个只是把蛋白进行电泳分析,主要用于蛋白纯度分析及分子量分析,主要用于定性;后者则是在前者的基础上又经过了转膜及杂交等步骤,用于分析特定蛋白的表达多少的。
sds page 胶是用来分离蛋白的,而western blot是用sds page 胶分离蛋白后再转膜,然后用一抗二抗孵育,最后显色,出现蛋白条带的一个检测蛋白的方法。00分享举报
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)按照缓冲液的pH值和凝胶孔径的差异及有无浓缩效应分为连续系统和不连续系统两大类连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同,带电颗粒在电场作用下,主要靠电荷和分子筛效应不连续系统中由于缓冲液离子成分,pH,凝胶浓度及电位梯度的不连续性,带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷...
蛋白质免疫印迹法,WB是基于蛋白质SDS-PAGE电泳分离和特异性抗体识别蛋白的特性,通过显色技术,以达到检测目的蛋白的技术,样品中蛋白的分离,定性比较不同组别的差异。sds-page可以用来分离和鉴定蛋白质,另外可以根据迁移率大小测定某些蛋白质的分子量可进一步做westernblot 进行半定量比较各组间的差异。
三、Western Blot 1.在跑胶过程中,配置好半干转膜液(纯水:无水乙醇:5XTransfer Buffer=3:1:1)和封闭液(脱脂奶粉1.5g+TBST30ml); 2.提前把两块白色厚滤纸泡在转膜液中,另取一个小槽,倒入少许转膜液备用; 3.电泳结束后,拿出带胶的玻璃板放置在桌面上,用工具轻轻撬开玻璃板,根据Marker确定好目的蛋白位置,切...
一、蛋白质SDS-PAGE电泳 1、安装垂直板电泳装置 用洗洁精、清水和无水乙醇清洗两块玻璃板,晾干后安装。 2、制备SDS-聚丙烯酰胺凝胶 (1)配制9%分离胶(15ml):双蒸水 6.55ml,1.5M Tris-HCl(pH8.8)3.75ml,30%丙烯酰胺储存液(Acry/Bis)4.5ml,10%SDS 150ml,10%过硫酸铵(APS)50ml,混匀后加入3.75ml TEMED,...
(1)当我们把混合样品通过SDS-PAGE电泳分离之后,理论上可以通过所得条带的分子量来鉴定目的蛋白是否存在,但是这种鉴定受到很多因素的干扰,非常不准确。因此我们需要进一步使用Western blot (蛋白质印迹法)来鉴定血清中的IgG含量的多少。 凝胶上的蛋白质条带