RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的RNA。RT-PCR广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种RNA的含量。检测基因表达的方法，参见Northern Blot法。RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录，要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质。常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞病毒...
RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆 特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组 DNA的污染。提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随...
在总RNA含量中rRNA占最多,约80%.完整的总RNA样品应呈现出三条条带,分别为28S rRNA、18S rRNA、5S rRNA.其中28S rRNA条带的亮度应约为18S rRNA条带亮度的2倍,这表明RNA样品比较完整,基本无降解.如果两条带的亮度反过来,则说明RNA样品已发生降解.如果在点样槽内或槽附近有荧光区带,则表明RNA样品中有DNA污染...
1. 看是真核还是原核生物，真核生物RT-PCR的产物中不包括内含子，原核生物应该没什么区别；2. 不连...
RT-PCR:以mRNA为模板,反应体系中,加入反转录酶,RNA经过反转录酶反转录为cDNA,再以cDNA为模板进行的PCR反应称为RT—PCR。RT-PCR具有很高的敏感性,可以用来分析不同组织或是相同组织不同发育阶段中mRNA表达状况的相关性。 实时定量PCR:是一种在反应体系中加入荧光集团,运用Taq酶的5’-3'外切核酸酶活性和荧光能量...
它们的复制都受核的控制,复制所需的DNA聚合酶都是由核DNA编码,在细胞质核糖体上合成的 线粒体和叶绿体中除有DNA外,还有RNA(mRNA、tRNA、rRNA)、核糖体、氨基酸活化酶等.说明这两种细胞器都具有独立进行转录和转译的功能.也就是说,线粒体和叶绿体都具有自身转录RNA和翻译蛋白质的体系.但迄今为止,人们发现叶绿体...
为什么呢?曾经用什么条带也没有的RNA样品做RT-PCR后跑胶,结果却有正确的条带显示.是不是与RNA浓度有关呢?同一批血样提的RNA,操作都是一样的,怎么还会出现这么明显的差异呢?还有就是如果RNA纯度不高,那放入-80度保存后,多长时间内能保证RNA的纯度和当时提出来的一样呢?
盖德化工网 > 盖德问答 > 做RT-PCR提取总... 生物医学工程 做RT-PCR提取总RNA,按照步骤加了氯仿后并震荡后没有分层,可能是什么原因呢? 我现在做RT-PCR,提取总RNA,按照步骤加了氯仿(ph <5.0)后并震荡后没有分层.可能是什么原因呢? 0评论 +关注 ...
什么是RT-qPCR?& RNA一站式解决方案 起始材料:RNA 定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription PCR, RT-qPCR)是应用于以RNA作为起始材料的PCR实验中的一种实验方法。在该方法中,总RNA或信使RNA(mRNA)首先通过逆转录酶转录成互补DNA(cDNA)。随后,以cDNA为模板进行qPCR反应。RT-qPCR已被用于多种分子生物学的...