优点：1. 由于两步反应都在一个管中完成，因此该方法具有更少的实验误差;2. 一步法操作简便，加样环节少，更少的移液步骤能够减少污染的风险;3. 适用于高通量扩增/筛选，快速且可重现性高。缺点：1. 无法分别对两步反应进行优化;2. 一步法无法保存反转录后的 cDNA 产物，无法分别对两步反应进行条件优化，...
缺点:可能产生假阳性结果,需要通过熔解曲线分析识别扩增产物的特异性;需要不断优化反应体系以降低非特异性扩增;不适合进行多重qPCR检测。 ■而还有一种是使用荧光探针,又叫TaqMan探针法,其原理是根据目的基因设计一个能与之特异性结合的荧光探针,该探针包含两个基团:一个荧光基团和一个淬灭基团,正常情况下因为淬灭基团...
缺点: 1、特异性不是很高。染料可以插入任何双链DNA,包括引物二聚物和非特异性产物。 2、如果引物二聚体存在或者产物受到污染,得到的结果会不可靠。3、更容易与低丰度的目标产生非特异性荧光。 需要更多的时间进行结果分析。 二、寡核苷酸探针(Taqman) 这种方法涉及使用荧光标记的寡核苷酸(短DNA分子),探针通常在5...
RT-qPCR可通过一步法或两步法来完成(图1)。一步法RT-qPCR把逆转录与PCR扩增结合在一起,使逆转录酶与DNA聚合酶在同一管内同样缓冲液条件下完成反应。一步法RT-qPCR只需要利用序列特异性引物。在两步法RT-qPCR中,逆转录和PCR扩增过程是在两个管中完成,使用不同...
缺点: 特异性不是很高。染料可以插入任何双链DNA,包括引物二聚物和非特异性产物。 如果引物二聚体存在或者产物受到污染,得到的结果会不可靠。 更容易与低丰度的目标产生非特异性荧光。 需要更多的时间进行结果分析。 二、寡核苷酸探针(Taqman) 这种方法涉及使用荧光标记的寡核苷酸(短DNA分子),探针通常在5 '端和3...
3.RT-PCR，指的是逆转录PCR，以由mRNA逆转录成的cDNA为模板，以dNTP 为底物，进行DNA的扩增，属于PCR的变种，结果只能定性，不能定量。4.RT-qPCR，指的是实时荧光定量逆转录PCR，是qPCR+RT-PCR的组合，将总RNA或mRNA逆转录成cDNA后再作为模板，以dNTP为底物，进行qPCR的定量分析。
染料法和探针法荧光定量PCR(RT-qPCR)的优缺点比较由上海炎熙生物科技有限公司发布,详细内容为:一、荧光染料法(SYBR Green)其原理是:在PCR反应体系中加入过量荧光染料,DNA扩增的过
染料法和探针法RT-qPCR的优缺点比较 一、荧光染料法(SYBR Green) 其原理是:在PCR反应体系中加入过量荧光染料,DNA扩增的过程中,荧光染料特异性地掺入DNA双链,发射荧光信号,随着反应的进行,荧光强度逐渐增强,并且可以实时测量。如果你要扩增你的目标样品40个循环,在最后一个循环结束时检测到的荧光会比在第10个循环...
两种RT-qPCR方法的优缺点比较 实时聚合酶链反应(PCR)是基于PCR的革命性方法,这一技术是PCR高灵敏度和实时检测相结合的结果。实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)的*特征就是把目的基因的扩增与荧光信号联xi起来,并将其量化。 在定量基因表达分析,目前有两种方法shou欢迎, SYBR Green and TaqMan,那么这两种哪个更好呢...
4.RT-qPCR,指的是实时荧光定量逆转录PCR,是qPCR+RT-PCR的组合,将总RNA或mRNA逆转录成cDNA后再作为模板,以dNTP为底物,进行qPCR的定量分析。 不同PCR方法的主要优缺点: 声明:部分图源网络,侵权联删 整合了网上诸多资料,因此未能一一注明出处。如有侵权,请联系作者删除。