在该方法中,总RNA或信使RNA(mRNA)首先通过逆转录酶转录成互补DNA(cDNA)。随后,以cDNA为模板进行qPCR反应。RT-qPCR已被用于多种分子生物学的应用中,其中包括基因表达分析、RNA干扰验证、微阵列验证、病原体检测、基因测试和疾病研究。 RT-qPCR的一步法与两步法...
1、 反应体系需要在超净工作台中通风配制;每次实验都要用新的ddH2O; 2、每次实验都需要配制NTC来验证体系中是否存在污染,配制体系时每一对引物都需要做NTC; 3、如果想检测RNA模板是否有gDNA残留,可将每个样本都配制NRT进行检测; 4、配制体系时,一个样本建议至少做3个技术型重复; 5、模板为cDNA时,建议稀释5-10...
1)溶解曲线是为了验证扩增产物特异性,一般是单峰,和模板的浓度无关。2)一般SYBR法的目的基因在80~90 ℃之间。3)若出现其他峰,可能是引物二聚体导致需要优化引物序列、引物加量等因素。 图6:溶解曲线 注意事项 (1) 请确保引物的正确性和特异性。通常引物终浓度0.2 μM可以得到较好结果。反应性能较差时,可以在0...
验证Yeasen RT-qPCR全预混(Cat#11899ES)及竞品T品牌试剂中加入引物探针在4℃的稳定性,结果表明:含引物探针的Yeasen(Cat#11899ES)全预混试剂,在4℃放置7天后,扩增甲流和乙流模板2000 拷贝/mL 和200 拷贝/mL Ct值和荧光值无显著变化,性能稳定;同时在4℃放置7天后,Yeasen (Cat#11899ES)的Ct值和荧光值相较竞...
RNAi 技术的重点在 siRNA 设计,siRNA 设计优先使用文献中或预设计siRNA库中已经验证过的siRNA靶点,实验时同时使用多个有效靶点以排除脱靶效应,既可以直接使用siRNA片段,也可以使用shRNA来进行RNA干扰。 5miRNA 靶序列寻找 microRNA(miRNA)是一类长度在 22nt 左右的小 RNA 分子,它并不编码 蛋白质,因此 miRNA 与 siR...
在该方法中,总RNA或信使RNA(mRNA)首先通过逆转录酶转录成互补DNA(cDNA)。随后,以cDNA为模板进行qPCR反应。RT-qPCR已被用于多种分子生物学的应用中,其中包括基因表达分析、RNA干扰验证、微阵列验证、病原体检测、基因测试和疾病研究。 RT-qPCR的一步法与两步法...
我按照 SOP 里的实验步骤一步步操作,结果就是不太好。 这时候师姐也来凑热闹。 师姐 我看师弟之前做了性能验证,方法上应该没问题,基因表达分析实验的起始步骤是 total RNA 提取,提取产物有没有检测? 用分光光度计检测了,都是正常的。 师姐 那RNA 完整性测了吗,样本抑制物检测做了吗?
我按照 SOP 里的实验步骤一步步操作,结果就是不太好。 我 这时候师姐也来凑热闹。 师姐 我看师弟之前做了性能验证,方法上应该没问题,基因表达分析实验的起始步骤是 total RNA 提取,提取产物有没有检测? 用分光光度计检测了,都是正常的。 我 师姐
在该方法中,总RNA或信使RNA(mRNA)首先通过逆转录酶转录成互补DNA(cDNA)。随后,以cDNA为模板进行qPCR反应。RT-qPCR已被用于多种分子生物学的应用中,其中包括基因表达分析、RNA干扰验证、微阵列验证、病原体检测、基因测试和疾病研究。 RT-qPCR的一步法与两步法...
我按照 SOP 里的实验步骤一步步操作,结果就是不太好。 我 这时候师姐也来凑热闹。 师姐 我看师弟之前做了性能验证,方法上应该没问题,基因表达分析实验的起始步骤是 total RNA 提取,提取产物有没有检测? 用分光光度计检测了,都是正常的。 我 ...