步骤1. 冻干粉ConviFlex™RT-Taq Mix,最大速离心5秒钟,然后加入260μl复溶缓冲液2×Rehydration Buffer,室温静置5分钟后,涡旋并离心5秒钟,分装,待用或-18℃保存。步骤2. 每个反应体系为20µl,其中反应mix为15µl。(1)依据本次试验样本数,制备RT-qPCR的反应mix。1个反应mix需要:①ConviFlex™ RT...
步骤1. 冻干粉ConviFlex™RT-Taq Mix,最大速离心5秒钟,然后加入260μl复溶缓冲液2×Rehydration Buffer,室温静置5分钟后,涡旋并离心5秒钟,分装,待用或-18℃保存。 步骤2. 每个反应体系为20µl,其中反应mix为15µl。 (1)依据本次试验样本数,制备RT-qPCR的反应mix。 1个反应mix需要: ①ConviFlex...
一、样本质量是 RT-qPCR 实验成功的关键因素之一 使用高纯度(不含 DNA 和蛋白质及抑制物)和高度完整(无降解)的 RNA进行实验是整个 RT-qPCR 实验流程中很关键的环节。降解或污染的 RNA 会产生低质量的 cDNA,从而导致 qPCR 反应效率低下,并导致不准确的低质量数据,具体表现为: ●RNA 不纯将导致对下游 PCR 反...
根据MIQE（Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments）的指导方针，qPCR为Quantitative real-time PCR的简称，RT-qPCR指的是Reverse transcription–qPCR，RT-PCR仅用来表示Reverse transcription polymerase chain reaction，而不是Real-time PCR，但是有少数作者并没有坚持这一原则。
步骤1. 冻干粉ConviFlex™RT-Taq Mix,离心5秒钟,然后加入260μl复溶缓冲液2×Rehydration Buffer,室温静置5分钟后,涡旋并离心5秒钟,分装,待用或-18℃保存。 步骤2. 每个反应体系为20µl,其中反应mix为15µl。 (1)依据本次试验样本数,制备RT-qPCR的反应mix。 1个反应mix需要: ①ConviFlex™ RT-...
步骤1. 冻干粉ConviFlex™RT-Taq Mix,**速离心5秒钟,然后加入260μl复溶缓冲液2×Rehydration Buffer,室温静置5分钟后,涡旋并离心5秒钟,分装,待用或-18℃保存。 步骤2. 每个反应体系为20µl,其中反应mix为15µl。 (1)依据本次试验样本数,制备RT-qPCR的反应mix。
●RNA 的纯度和完整性是不相关的两个指标,都需要进行检测以确保高质量的 RNA 用于下游实验。 对于RT-qPCR,要尽力避免所谓的「garbage in = garbage out」。获得高品质 RNA 需要注意: 1、尽量避免 RNA 酶污染,使用无 RNA 酶的耗材和试剂,戴手套口罩,建议将提取和扩增的场所分开。
步骤1. 冻干粉ConviFlex™RT-Taq Mix,最大速离心5秒钟,然后加入260μl复溶缓冲液2×Rehydration Buffer,室温静置5分钟后,涡旋并离心5秒钟,分装,待用或-18℃保存。 步骤2. 每个反应体系为20µl,其中反应mix为15µl。 (1)依据本次试验样本数,制备RT-qPCR的反应mix。
操作步骤 1、从RNA（或mRNA）反转录合成cDNA第一链：2、于95℃加热5～10min，灭活反转录酶，使RNA—cDNA杂交体变性，然后迅速冰浴冷却：3、PCR扩增：方法基本同PCR。cDNA第一链合成方法：20ul反应液中含10xPCR扩增缓冲液，2ul；四种dNTP（10 mmol/L）2ul；RNA酶抑制剂20U；mRNA，l～2ug（或RNA 5-10ug...