(2)实时荧光定量反转录PCR(Real-time RT-PCR,RT-qPCR) 实时荧光定量反转录PCR(Real-time RT-PCR,RT-qPCR)是qPCR和RT-PCR的组合,所以RT-qPCR(也有人写成qRT-PCR)是结合了荧光定量技术的反转录PCR,即以mRNA或总RNA为模板,先反转录得到cDNA,再以cDNA为模板,通过荧光定量PCR进行定量检测分析(RT-PCR只可以定性...
相比于RT-PCR只能进行定性分析,RT-qPCR的优势在于能够进行定量分析。类似于RT-PCR,RT-qPCR定量分析RNA的方法有两种:一步法和两步法。这两种方法都需要先将RNA反转录为cDNA,然后再将其作为qPCR扩增的模板,一步法中的RT和qPCR在同一试管中进行,例如Magigen OneStep RT-qPCR Kit,减少了实验污染,提高了效率;而两步法...
优点：1. 由于两步反应都在一个管中完成，因此该方法具有更少的实验误差;2. 一步法操作简便，加样环节少，更少的移液步骤能够减少污染的风险;3. 适用于高通量扩增/筛选，快速且可重现性高。缺点：1. 无法分别对两步反应进行优化;2. 一步法无法保存反转录后的 cDNA 产物，无法分别对两步反应进行条件优化，...
缺点: 1、特异性不是很高。染料可以插入任何双链DNA,包括引物二聚物和非特异性产物。 2、如果引物二聚体存在或者产物受到污染,得到的结果会不可靠。3、更容易与低丰度的目标产生非特异性荧光。 需要更多的时间进行结果分析。 二、寡核苷酸探针(Taqman) 这种方法涉及使用荧光标记的寡核苷酸(短DNA分子),探针通常在5...
一步法的缺点包括:1. 无法对两步反应进行独立优化;2. 反应条件需兼顾两步反应,导致灵敏性相对较低;3. 单次检测能覆盖的靶点数有限。两步法的优点包括:1. 能够构建稳定的cDNA库,便于长期保存并多次使用;2. 靶基因与内参基因可从同一cDNA库中扩增,避免了多重cDNA库的使用;3. 可针对单一反应过程优化反应缓冲液...
图1.一步法与两步法RT-qPCR 一步法 优点: 1. 由于两步反应都在一个管中完成,因此该方法具有更少的实验误差; 2. 更少的移液步骤能够减少污染的风险; 3. 适用于高通量扩增/筛选,快速且可重现性高。 缺点: 1. 无法分别对两步反应进行优化; 2. 由于反应...
3.RT-PCR，指的是逆转录PCR，以由mRNA逆转录成的cDNA为模板，以dNTP 为底物，进行DNA的扩增，属于PCR的变种，结果只能定性，不能定量。4.RT-qPCR，指的是实时荧光定量逆转录PCR，是qPCR+RT-PCR的组合，将总RNA或mRNA逆转录成cDNA后再作为模板，以dNTP为底物，进行qPCR的定量分析。
两种RT-qPCR方法的优缺点比较 摘要 RT-qPCR方法哪种比较好?看看研究僧怎么说 分享按钮 实时聚合酶链反应(PCR)是基于PCR的革命性方法,这一技术是PCR高灵敏度和实时检测相结合的结果。实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)的独特特征就是把目的基因的扩增与荧光信号联系起来,并将其量化。 在定量基因表达分析,目前有两种...
4.RT-qPCR,指的是实时荧光定量逆转录PCR,是qPCR+RT-PCR的组合,将总RNA或mRNA逆转录成cDNA后再作为模板,以dNTP为底物,进行qPCR的定量分析。 不同PCR方法的主要优缺点: 声明:部分图源网络,侵权联删 整合了网上诸多资料,因此未能一一注明出处。如有侵权,请联系作者删除。