PCR、qPCR、RT-PCR和RT-qPCR这四种技术的主要区别在于它们的应用领域和检测目标不同。PCR主要用于DNA序列的扩增和检测;qPCR可以实时定量检测DNA或cDNA的含量;RT-PCR主要用于RNA分子的扩增和检测;而RT-qPCR则结合了RT-PCR和qPCR的技术,可以对RNA分子进行定量分析。 (四)总结 1.PCR,通常指的是普通PCR,以双链DNA为...
优点：1. 由于两步反应都在一个管中完成，因此该方法具有更少的实验误差;2. 一步法操作简便，加样环节少，更少的移液步骤能够减少污染的风险;3. 适用于高通量扩增/筛选，快速且可重现性高。缺点：1. 无法分别对两步反应进行优化;2. 一步法无法保存反转录后的 cDNA 产物，无法分别对两步反应进行条件优化，...
相比于RT-PCR只能进行定性分析,RT-qPCR的优势在于能够进行定量分析。类似于RT-PCR,RT-qPCR定量分析RNA的方法有两种:一步法和两步法。这两种方法都需要先将RNA反转录为cDNA,然后再将其作为qPCR扩增的模板,一步法中的RT和qPCR在同一试管中进行,例如Magigen OneStep RT-qPCR Kit,减少了实验污染,提高了效率;而两步法...
缺点：1. 更多的移液步骤会增加DNA污染的风险，并且耗时;2. 相较于一步法，需要进行更多的优化。
缺点:操作繁琐;特异性和敏感性低;容易污染其他实验,只能定性不能定量。 qPCR 优点:特异性和灵敏度高;操作简便;可定量分析。 缺点:成本高;产物不可回收。 dPCR 优点:绝对定量;更高的敏感性和特异性。 缺点:成本昂贵;操作复杂;费时。 RT-PCR和RT-qPCR ...
RT-qPCR反应时,寡核苷酸两个基团分离,即可检测到荧光信号,并与PCR产物同步。 使用这种方法的荧光检测依赖于两个过程:1)引物与目标序列的结合(2)探针与引物下游 互补序列的结合。 优点: 1、更有可能只放大所需的产物,由于引物和探针的结合具有特异性。 2、不需要解离曲线,只有探针与正确的目的序列结合时才能检测...
与RT-qPCR法相比,RNA捕获探针法中特异性靶标捕获法磁珠提取技术只提取了病毒RNA,从而排除其他核酸或杂质的干扰,获得更高纯度的模板,且逆转录和扩增实时同步进行,扩增效率更高,扩增产物为RNA,降解快,还可大幅降低实验室污染风险。可看出,RNA捕获探针法的确...
PCR、qPCR、RT-PCR和RT-qPCR这四种技术都是基于聚合酶链式反应(PCR)的技术,但是它们之间存在一些区别。 PCR:聚合酶链式反应(PCR)是一种体外扩增DNA分子的技术,利用DNA聚合酶和多个引物在所需温度下扩增目标DNA分子。PCR反应分为三个阶段:预变性、变性-退火-延伸和延伸。PCR技术主要用于DNA序列的扩增和检测,应用广泛...
在提取完RNA后,需对目的基因进行实时qPCR检测,将逆转录和qPCR检测在一管中完成反应,还是老老实实等逆转录上机反应完,再配置qPCR反应体系二次上机检测?当然两种方法各有优缺点,一步法RT-qPCR反应当然更便捷,总体加样及操作时间更少,但不具备足够的灵活性和可调整性,而两步法则对于实验进度的把控更为细节。