RT-PCR的试剂都应在冰上融化,等完全融化后再取;用过的试剂应瞬间离心后放回-20℃保存;试剂应按顺序加,加完后再混匀离心。 加入试剂前在管壁上做好标记,避免加错试剂;加过一种试剂后将EP管盖子的方向改变,避免重复和漏加;不同试剂和样品要更换吸嘴,避免污染;吸取试剂和样品前检查移液器的标数是否正确,核...
一. RT-qPCR 基本原理和概念实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,通过收集荧光信号,对 PCR进程进行实时...
4.RT-PCR反应 4.1准备引物 4.1.1引物溶解方法 4.1.1.1将盛放冻干引物干粉的Eppendorf离心管放入离心机,插入离心管时应注意放置方向,10000rpm离心10min。 4.1.1.2小心取出离心管,放置到合适的试管架上,在PCR实验室的“准备间”溶解稀释引物。 4.1.1.3小心打开Eppendorf管,按照4.2“引物加水配制表”加入RNase-free ddH...
1、PCR引物设计 PCR反应中有两条引物，即5′端引物和3′引物。设计引物时以一条DNA单链为基准（常以信息链为基准），5′端引物与位于待扩增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物与位于待扩增片段3′端的一小段DNA序列互补。引物设计的基本原则：引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。引物碱...
根据题意得：x<sub>1</sub>=1，x<sub>2</sub>=2，x<sub>3</sub>=3，x<sub>4</sub>=2，x<sub>5</sub>=1，由此的出规律“前进3步后退2步”这5秒组成一个循环结构，把n是5的倍数哪些去掉，就剩下1～4之间的数，然后再按“前进3步后退2步”的步骤去算，就可得出①，②，④．...
逆转录RT-PCR实验操作程序及注意事项 实验操作过程中必须戴口罩、手套,实验室尽量避免人员干扰。 RT-PCR的试剂都应在冰上融化,等完全融化后再取;用过的试剂应瞬间离心后放回-20℃保存;试剂应按顺序加,加完后再混匀离心。 加入试剂前在管壁上做好标记,避免加错试剂;加过一种试剂后将EP管盖子的方向改变,避免...
手足口病rt-pcr检测标准操作程序_tiangen_1_2(试用)(2008年5月22日第1版,2008年5月29日修改)内部标准编号:检测项目:肠道病毒EV71、CA16,其他肠道病毒检测方法:RT-PCRPCR仪器:Bio-Rad iCycler检测原理根据已知肠道病毒5’-UTR区基因序列及EV71、CA16的VP1-VP3基因序列,设计特异性引物(PE、EV71、CA16),通过Ne...
反应体系放入PCR仪前应检查荧光定量PCR仪的反应程序或设计新的反应程序,做PCR时循环参数应根据反应体系来定。 逆转录完成后,产物要加灭菌去了离子水稀释后再做PCR。这一步容易遗忘,不但导致结果异常,还浪费RT产物及其他试剂。 琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物是非常重要的,内参的上样量应减半。制胶时要保证上样孔完整,...