RT-PCR的试剂都应在冰上融化,等完全融化后再取;用过的试剂应瞬间离心后放回-20℃保存;试剂应按顺序加,加完后再混匀离心。 加入试剂前在管壁上做好标记,避免加错试剂;加过一种试剂后将EP管盖子的方向改变,避免重复和漏加;不同试剂和样品要更换吸嘴,避免污染;吸取试剂和样品前检查移液器的标数是否正确,核...
一. RT-qPCR 基本原理和概念实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,通过收集荧光信号,对 PCR进程进行实时...
4.RT-PCR反应 4.1准备引物 4.1.1引物溶解方法 4.1.1.1将盛放冻干引物干粉的Eppendorf离心管放入离心机,插入离心管时应注意放置方向,10000rpm离心10min。 4.1.1.2小心取出离心管,放置到合适的试管架上,在PCR实验室的“准备间”溶解稀释引物。 4.1.1.3小心打开Eppendorf管,按照4.2“引物加水配制表”加入RNase-free ddH...
1、PCR引物设计 PCR反应中有两条引物,即5′端引物和3′引物。设计引物时以一条DNA单链为基准(常以信息链为基准),5′端引物与位于待扩增片段5′端上的一小段DNA序列相同;3′端引物与位于待扩增片段3′端的一小段DNA序列互补。引物设计的基本原则:引物长度:15-30bp,常用为20bp左右。引物碱...
更多“RT—PCR的扩增检测需要首先经过什么程序后才能进行PCR循环()”相关的问题 第1题 扩增RNA首先需要进行逆转录,其原因是下列哪一个A.Taq聚合酶不能扩增RNAB.逆转录后扩增效率高C.Ta 扩增RNA首先需要进行逆转录,其原因是下列哪一个 A.Taq聚合酶不能扩增RNA B.逆转录后扩增效率高 C.Taq聚合酶扩增RNA效率...
下列叙述中属于实验室检查内容的是()。 A. 发病的猪没有按照正规免疫程序进行预防接种 B. 病猪1d前发病,发病时体温升高,食欲减退 C. 采用RT-PCR检测病猪血液中的猪呼吸与繁殖综合征病毒,检测结果呈阳性 D. 就诊时,叩诊肺区呈现浊音 相关知识点:
逆转录RT-PCR实验操作程序及注意事项 实验操作过程中必须戴口罩、手套,实验室尽量避免人员干扰。 RT-PCR的试剂都应在冰上融化,等完全融化后再取;用过的试剂应瞬间离心后放回-20℃保存;试剂应按顺序加,加完后再混匀离心。 加入试剂前在管壁上做好标记,避免加错试剂;加过一种试剂后将EP管盖子的方向改变,避免...
逆转录RT-PCR实验操作程序及注意事项 实验操作过程中必须戴口罩、手套,实验室尽量避免人员干扰。 RT-PCR的试剂都应在冰上融化,等完全融化后再取;用过的试剂应瞬间离心后放回-20℃保存;试剂应按顺序加,加完后再混匀离心。 加入试剂前在管壁上做好标记,避免加错试剂;加过一种试剂后将EP管盖子的方向改变,避免...
手足口病RT-PCR检测标准操作程序(200年月日第1版) 标准编号: 检测项目: 检测方法: PCR PCR仪器: Bio-Rad iCycler 检测原理 ’-UTR区基因序列及EV71、CA16的VP1-VP3基因序列,设计特异性引物(PE、EV71、CA16),通过Nested RT-PCR扩增基因片段,检测标本中是否存在肠道病毒EV71、CA16和其他肠道病毒。所用引物序列...
反应体系放入PCR仪前应检查荧光定量PCR仪的反应程序或设计新的反应程序,做PCR时循环参数应根据反应体系来定。 逆转录完成后,产物要加灭菌去了离子水稀释后再做PCR。这一步容易遗忘,不但导致结果异常,还浪费RT产物及其他试剂。 琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物是非常重要的,内参的上样量应减半。制胶时要保证上样孔完整,...