cDNA是一种由mRNA逆转录而来的DNA(有单/双链两种情况),通常用于研究基因表达和克隆。cDNA是单链还是双链得根据实际情况,例如RT-PCR, 3'或5' RACE,我们只使用单链cDNA(第一链cDNA),其它情况如构建表达载体,qRT-PCR等是双链。一般情况下,cDNA它是在体外经过逆转录后与RNA互补的DNA链(可以参见转录试剂盒的说明...
逆转录PCR利用逆转录病毒依赖于RNA的DNA逆转录合成酶,在反义引物或oligo(d T)的引导下合成mRNA互补的DNA(complemental DNA),再按普通的PCR的方法用两条引物以cDNA为模板,扩增出不含内含子的可编码完整蛋白的基因。这一DNA的5,和3,端经改造可直接用于基因工程的表达,因此逆转录PCR成为了目前获取目的基因的一条重...
RT-PCR就是逆转录PCR(Reverse transcription PCR)或称为反转录PCR(Reverse transcription-PCR,RT-PCR),是以RNA为材料应用于PCR扩增中的一种实验方法。首先通过逆转录酶将总RNA或信使RNA(mRNA)转录成互补DNA(cDNA)。其次Taq DNA聚合酶以cDNA为模板进行qPCR扩增。RT-PCR已...
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR) 的原理是:提取组织或细胞中的总 RNA,以其中的 mRNA 作为模板,采用 Oligo(dT) 或随机引物利用逆转录酶反转录成 cDNA。再以 cDNA 为模板进行 PCR 扩增,而获得目的 基因或检测基因表达。RT-PCR使 RNA 检测的灵敏性提高了几个数量级...
RT-PCR是将RNA反转录 (RT) 与cDNA的聚合酶链式反应 (PCR) 相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA ...
cDNA 的合成首先在逆转录缓冲液中进行,然后取出1/10的反应产物进行 PCR。 而一步法RT-PCR 具有其它优点(表2), cDNA 合成和扩增反应在同一管中进行, 不需要打开管盖和转移, 有助于减少污染。还可以得到更高的灵敏度, 最低可以达到0.1pg 总RNA,因为整个cDNA样品都被扩增。对于成功的一步法RT-PCR, 一般使用...
RT-PCR的基本原理(图4.1)。首先是在逆转录酶的作用下从RNA合成 cDNA,即总RNA中的mRNA在体外被反向转录合成DNA拷贝,因拷贝DNA的核苷酸序列完全互补于模板mRNA,称之为互补DNA(cDNA);然后再利用DNA聚合酶,以cDNA第一链为模板,以四种脱氧核苷三磷酸(dNTP)为材料,在引物的引导下复制出大量的cDNA或目的片段。
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。合成cDNA引物的选择是分子生物学实验中的一项关键步骤，它直接...
反转录过程由反转录酶催化，该酶也称依赖RNA的DNA聚合酶），即以RNA为模板催化DNA链的合成。合成的DNA链称为与RNA互补DNA（cDNA）。三、PCR技术是基于DNA/cDNA为摸板的扩增过程 PCR技术的基本原理:类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤...