逆转录PCR（reverse transcription PCR）或者称反转录PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR），是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。技术介绍 由一条RNA单链转录为互补DNA（cDNA）称作“逆转录”，由依赖RNA的DNA聚合酶（逆...
RT- PCR,英文名为 Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,即逆转录PCR,是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。这项技术使用的逆转录酶来自逆转录病毒,是一种能按照碱基互补配对原则,以脱氧核糖核苷酸为底物,以寡居dT为引物,把mRNA转换成相应DNA的酶,由于该酶的效果与中心法则(DNA...
一般合成cDNA使用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)。逆转录酶PCR (RT-PCR)是扩增靶RNA的聚合酶链反应的一种变体。在PCR之前添加逆转录酶(RT)酶使扩增和检测RNA靶标成为可能。逆转录酶转录模板RNA并形成互补DNA (cDNA)。单链cDNA通过DNA聚合酶转化为双链DNA。这些DNA分子...
RT-PCR其操作方法分为两种,即一步法和两步法。一步法RT-PCR,逆转录同PCR扩增结合在一起,即cDNA合成与PCR扩增反应在同一管Buffer及酶中进行,一步完成。两步法RT-PCR,RNA首先在反转录酶的作用下生成cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增,分成两步进行。
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。合成cDNA引物的选择是分子生物学实验中的一项关键步骤，它直接...
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。作用 RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极...
16.RT-PCR是将 RNA逆转录 (RT)成cDNA (与 mRNA互补的DNA单链) 和聚合酶链式反应(PCR)相结合的技术,具体过程如图所示,下列叙述正确的是(D)5/一3mRNA3'A5I35'cDNA35'B3'- 5'T II3553 A.过程I获得cDNA的过程与DNA复制过程中存在的碱基配对方式相同 B.图中 A、 B两种引物的核苷酸序列不同,但参与...
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR) 的原理是:提取组织或细胞中的总 RNA,以其中的 mRNA 作为模板,采用 Oligo(dT) 或随机引物利用逆转录酶反转录成 cDNA。再以 c…
逆转录酶的酶学特性 逆转录酶属于DNA聚合酶的一类,可以聚合dNTP合成cDNA链,这一过程的发生,依赖于逆转录酶的2大活性:DNA聚合酶活性和RNase H活性。 DNA聚合酶活性:以RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,在引物tRNA的3′末端以5′→3′方向合成DNA。值得注意的是该酶不具有3′→5′外切酶活性,因此没有校正功能,会导致...