过程Ⅱ首先将mRNA-cDNA杂合双链解开,再以单链cDNA为模板合成双链DNA,最后利用PCR技术进行大量扩增。 (1)过程Ⅰ以mRNA为模板合成cDNA的过程,表示逆转录,需要加入缓冲液、原料、RNA提取物、逆转录酶和引物A等。 (2)过程Ⅰ以mRNA为模板合成cDNA,形成cDNA-mRNA杂合双链。因此,过程Ⅱ首先要将反应体系的温度升高到95 ...
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。作用 RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极...
逆转录PCR（reverse transcription PCR）或者称反转录PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR），是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。技术介绍 由一条RNA单链转录为互补DNA（cDNA）称作“逆转录”，由依赖RNA的DNA聚合酶（逆...
RT-PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应相结合的技术,具体过程如图所示,有关叙述正确的是( ) A. 过程Ⅰ需要加入脱氧核苷酸、mRNA、RN
过程Ⅱ首先将mRNA-cDNA杂合双链解开,再以单链cDNA为模板合成双链DNA,最后利用PCR技术进行大量扩增。 (1)过程Ⅰ以mRNA为模板合成cDNA的过程,表示逆转录,需要加入缓冲液、原料、RNA提取物、逆转录酶和引物A等。 (2)过程Ⅰ以mRNA为模板合成cDNA,形成cDNA-mRNA杂合双链。因此,过程Ⅱ首先要将反应体系的温度升高到95 ...
(2)过程②将反应体系的温度升高到95 ℃的目的是让逆转录酶变性失活,同时使mRNA-cDNA杂合双链解开。 接下来所用的Taq DNA聚合酶至少应能耐受95 ℃高温。 (3)决定RT-PCR扩增片段的是引物A和引物B上的核苷酸序列,要对图中单链cDNA进行n次循环的扩增,理论上至少需要2n-1个引物B。 (4)利用RT-PCR技术可对某些...
1、分析图1:过程Ⅰ是由mRNA形成cDNA的过程,表示逆转录。过程Ⅱ先使mRNA-cDNA杂合双链解开,再以单链的DNA合成双链的DNA,最后利用RCR技术进行DNA复制。 2、PCR技术的原理是模拟生物体内DNA分子复制的过程,利用DNA分子热变形原理,通过控制温度控制控制DNA分子的解聚和结合,DNA分子体内复制过程DNA的解旋是在解旋酶的...
(10分)RT-PCR是将mRNA逆转录(过程Ⅰ)和cDNA(mRNA逆转录产生的互补DNA)聚合酶链式反应(过程Ⅱ)相结合的技术,具体过程如图1所示,图2为某兴趣小组设计的引物。请分析回答下列问题: (1)过程Ⅰ主要涉及的酶是___,进行过程Ⅱ的反应体系中常用的酶是___,二者都能催化___键的形成。 (2)过程Ⅰ和过程Ⅱ利用的原料...
新型冠状病毒的检测方法很多,实时荧光RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)法是目前核酸检测的主要方法,操作流程:采集样本→提取RNA→逆转录成cDNA→PCR扩增→结果分析。如图是RT-PCR两步法的过程图,在PCR扩增时加入能与目的基因(新冠病毒的核壳蛋白N基因)结合的荧光探针。目的基因合成越多,荧光信号越强,回答下列问题。(1...