逆转录PCR（reverse transcription PCR）或者称反转录PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR），是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。技术介绍 由一条RNA单链转录为互补DNA（cDNA）称作“逆转录”，由依赖RNA的DNA聚合酶（逆...
逆转录PCR利用逆转录病毒依赖于RNA的DNA逆转录合成酶,在反义引物或oligo(d T)的引导下合成mRNA互补的DNA(complemental DNA),再按普通的PCR的方法用两条引物以cDNA为模板,扩增出不含内含子的可编码完整蛋白的基因。这一DNA的5,和3,端经改造可直接用于基因工程的表达,因此逆转录PCR成为了目前获取目的基因的一条重...
cDNA是一种由mRNA逆转录而来的DNA(有单/双链两种情况),通常用于研究基因表达和克隆。cDNA是单链还是双链得根据实际情况,例如RT-PCR, 3'或5' RACE,我们只使用单链cDNA(第一链cDNA),其它情况如构建表达载体,qRT-PCR等是双链。一般情况下,cDNA它是在体外经过逆转录后与RNA互补的DNA链(可以参见转录试剂盒的说明...
RT-PCR就是逆转录PCR(Reverse transcription PCR)或称为反转录PCR(Reverse transcription-PCR,RT-PCR),是以RNA为材料应用于PCR扩增中的一种实验方法。首先通过逆转录酶将总RNA或信使RNA(mRNA)转录成互补DNA(cDNA)。其次Taq DNA聚合酶以cDNA为模板进行qPCR扩增。RT-PCR已...
RT-PCR是将RNA的逆转录(RT)和cDNA聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。如图是RT-PCR过程示意图,①和②为逆转录过程,③是PCR过程。据图分析下列叙述错误的是( )A.该技术可用来检测新冠病毒等RNA病毒B.该技术可用来检测组织细胞中基因的转录C.①②过程需要的酶是逆转录酶,③过程中需要的酶是Taq酶D.③过程中DNA...
RT-PCR可以通过一步法或两步法的形式进行。 一步法即反转录和PCR扩增在同一管内完成,cDNA合成和扩增之间不需要打开反应管盖,有助于减少污染,操作方便快捷。而且反转录得到的所有cDNA都用来扩增, 所以灵敏度高,最低可达到0.01 pg总RNA。一步法RT-PCR 一般使用基因特异性引物起...
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR) 的原理是:提取组织或细胞中的总 RNA,以其中的 mRNA 作为模板,采用 Oligo(dT) 或随机引物利用逆转录酶反转录成 cDNA。再以 cDNA 为模板进行 PCR 扩增,而获得目的 基因或检测基因表达。RT-PCR使 RNA 检测的灵敏性提高了几个数量级...
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。作用 RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极...
(3)RT—PCR:用提取的mRNA或总RNA(含有mRNA)为模板,通过逆转录扩增cDNA。是检测特定基因表达水平的主要方法之一,也是用于鉴别、诊断RNA病毒的重要技术。 (4)原位PCR:与原位杂交一样,原位PCR也无需提取DNA/RNA,直接用组织切片和细胞进行PCR或RT—PCR。它既能鉴定含有靶DNA/RNA序列的细胞,又能确定靶DNA/RNA序列在...