如果研究模型是心或骨骼,β-actin作为内参显然不合适。 当细胞向恶性转化时,β-actin mRNA的表达水平增加,正常组和肿瘤组间的β-actin的表达差异相当大,限制了β-actin的适用范围。 假基因的存在也可能干扰β-actin的检测。有研究认为β-actin在肝组织的内脏组织中的表达不稳定,不是内参的最佳选择。 18S rRNA ...
内参基因的选择是RT-PCR实验中一个非常关键的步骤。一般来说,内参基因应满足以下几个条件: 1.广泛表达:内参基因应在所研究的样本中广泛表达,以确保其在不同条件下的表达水平相对稳定。此外,内参基因的表达水平还应适中,不过高也不过低,以便在实验中能够得到可靠的PCR信号。 2.稳定表达:内参基因的表达水平不应受到...
反转录RT—PCR的内参如何选择? RT—PCR就是将RNA先反转录为cDNA,再将转录得到的cDNA作为模板进行PCR反应扩增目标片段。用于反转录的引物根据实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT及基因特异引物的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA三种都可。 1)随机引物:适用于长的具有发卡结构的RNA。适用于rRNA、mRNA...
内参的选择在实时荧光定量PCR中至关重要，尤其在使用RNA逆转录成cDNA时，不同样本的起始RNA浓度可能不一致，这会影响实验结果的准确性。因此，选择合适的内参基因是确保实验结果可靠性的关键步骤。一般而言，对于实时荧光定量PCR，内参基因的片段长度应控制在300bp以下，以确保其在扩增过程中表现稳定。内参基...
具体来说，在RT-PCR实验中，内参基因的引入可以通过设置专门的引物对，分别扩增内参基因和目标基因。这些引物不应该与目标基因的扩增引物混用，而应该在单独的反应孔中进行扩增。通过比较内参基因的相对表达量，可以有效地抵消实验操作中的非特异性差异，比如RNA提取效率、逆转录效率和PCR扩增效率的波动。选择...
这里,我们可以知道内参的作用,即通过测量内参,可以在后面分析过程中将不同样品的起始量均一化.内参需要选择在不同样品中有稳定表达量的基因,这就是为什么内参经常选择看家基因的原因.以小鼠为例,常用的内参有actin gapdh hprt等等.当然,现在的很多观点认为这些基因在不同组织中丰度也不同,例如gapdh,在线粒体含量高...
➢内参基因的选择 1.内参基因选择标准 1).在组织和细胞中表达量相对较高2).稳定表达于不同类型的细胞和组织3).表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关4).不受任何内源性或外源性因素的影响5).不存在假基因，以避免基因组DNA的污染扩增 ➢内参基因的选择 2.常用的内参基因 1).常用的内参基因主要有管家...
比如血液样本的组学实验后期的分子验证、以及血液样本的biomarker筛选,常常都会涉及到RT-PCR实验,由于临床血液样本的特殊性,广大科研工作者在提取RNA过程中,常常面临提取的RNA质量差、总量少或很快降解,以及内参选择不当等常见问题,由此让很多科研工作者对于血液样本的RT-PCR望而却步。
20171 科学研究}'^*o*o*o*o»,^测定猪不同组织基因表达时 RT - PCR 内参基因的选择齐 波 1 , 朱荣生 2 3 , 王怀中 2 3 , 孙守礼 2 3 , 王建才 2 3 , 刘俊珍 2 3 , 黄保华 2,3 * , 呼红梅 2 3( 1 .青岛农业大学动物科技学院,山东青岛 266109 ; . 山东省农业科学院畜牧兽医研究所...