解析:(1)RTPCR又称逆转录PCR,是利用一条RNA链逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。此过程需要的酶是逆转录酶和Taq酶。大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成。(2)由于大肠杆菌细胞不具备内质网和高尔基体,从而使初始合成的蛋白质不能进一步被加工、包装和转运,而酵母菌是真核生物,生产的产物...
(2)进行RT-PCR需要加入的酶有:进行逆转录所需的逆转录酶和进行PCR所需的Taq酶(热稳定性强的DNA聚合酶)。 (3)分析题意可知:抗原-抗体杂交技术关键是要生产出能与新冠病毒结合的特异性抗体。生产这种抗体的基本思路与生产单克隆抗体的过程相近,具体如下: ...
(1)RT-PCR是指以病毒的RNA为模板通过___过程合成cDNA,并对cDNA进行PCR扩增的过程。进行RT-PCR过程中,需要加入的酶有___。 (2)利用RT-PCR试剂盒对新型冠状病毒进行检测时,除借助上述RT-PCR技术外,还需要有特异性探针。制作该探针的依据是___,利用该探针对新型冠状病毒进行检测的原理是___。 (3)除核酸检测...
D、RT-PCR 技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中 RNA 病毒的含量和直 接克隆特定基因的 cDNA 序列,D正确。故选:BC。 据题干信息分析:进行RT-PCR时,RT-PCR是将RNA的逆转录(RT)和cDNA聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术,过程为mRNA→cDNA→DNA;除了在反应体系中加入RNA、逆转录酶、dNTP、...
(2)过程Ⅱ为聚合酶链式扩增反应,首先要将反应体系的温度升高到95℃,让逆转录酶变性失活、使mRNA—cDNA杂合双链解开,该反应体系中所用的Taq酶必需耐受环境温度,即95℃ 。 (3)DNA分子是半保留的方式复制,所以过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增,理论上至少需要2n-1个引物B。 (4)利用RT —PCR技术获取的目...
[解析](1)过程①是逆转录过程,操作时需要加入缓冲液、原料、模板(RNA提取物)、酶(逆转录酶)和引物A等。 (2)过程②将反应体系的温度升高到95℃的目的是让逆转录酶变性失活,同时使mRNA﹣cDNA杂合双链解开。接下来所用的TaqDNA聚合酶至少应能耐受95℃高温。 (3)决定RT﹣PCR扩增片段的是引物A和引物B上的核苷...
RT-PCR步骤: 1、收细胞,消化离心后弃上清,再瞬时离心吸干上清。Ep管也必须是无酶的。 2、以下步骤一定要用无酶枪头!!!每管都加入500ul的Trizol,吹打混匀,每管都要换枪头。 3、加100ul的三氯甲烷,剧烈晃动,离心,12000rpm,15min。 4、将离心后的液体吸200ul上清到新的EP管中,做好标记,千万不要吸到...
(1)过程I是由mRNA形成cDNA的过程,表示逆转录过程,需要加入逆转录酶,过程Ⅱ是PCR过程,需要加入热稳定性高的DNA聚合酶(Taq酶)。 (2)RT-PCR过程通过对温度的控制影响确的活性和DNA分子结构,从而使得整个反应过程有序地进行。 (3)过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增,根据DNA分子半保留复制特点可知,该过程理论上...