尽管RT-PCR试剂盒具有高特异性，但在某些情况下仍然可能发生非特异性扩增。这可能是由于引物设计不当、试剂污染或实验条件不佳等原因导致的。非特异性扩增会影响检测结果的准确性。结果解读困难：RT-PCR的结果解读需要一定的专业知识和经验。特别是在进行多重RT-PCR时，由于不同目标序列的扩增效率和荧光信号的差异，...
污染和假阳性问题:RT-PCR实验过程中,由于操作复杂且涉及多个步骤,容易引入污染,如DNA污染、RNA酶污染等。这些污染可能导致假阳性结果的出现,影响实验的准确性和可靠性。此外,如果引物设计不当或反应条件控制不严,也可能导致非特异性扩增,进一步增加假阳性的风险。 灵敏度与特异性的平衡:虽然RT-PCR具有高灵敏度的特点...
(2)实时荧光定量反转录PCR(Real-time RT-PCR,RT-qPCR) 实时荧光定量反转录PCR(Real-time RT-PCR,RT-qPCR)是qPCR和RT-PCR的组合,所以RT-qPCR(也有人写成qRT-PCR)是结合了荧光定量技术的反转录PCR,即以mRNA或总RNA为模板,先反转录得到cDNA,再以cDNA为模板,通过荧光定量PCR进行定量检测分析(RT-PCR只可以定性...
缺点：1. 更多的移液步骤会增加DNA污染的风险，并且耗时;2. 相较于一步法，需要进行更多的优化。
- 缺点：交互反应发生的机率较高。双抗体夹心法（Sandwich ELISA）- 优势：高灵敏、高专一性，抗原无须事先纯化。- 缺点：抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。竞争法（Competitive ELISA）- 优势：可适用比较不纯的样本，而且数据再现性很高。- 缺点：整体的敏感性和专一性都较差。最新ELISA技术 -...
荧光探针法的优点:具有强大的特异性检测能力;高灵敏度;非常适合于进行多重qPCR检测;在PCR之后无需进行任何处理,从而节省时间和原料成本。 荧光探针法的缺点:需要根据不同的序列,合成不同的探针;探针的水解依赖Taq酶外切酶的活性,定量时容易受试剂和酶性能的影响;淬灭难以彻底,本底较高;检测结果很难判断实际的扩增特性...
染料法和探针法荧光定量PCR(RT-qPCR)的优缺点比较 一、荧光染料法(SYBR Green) 其原理是:在PCR反应体系中加入过量荧光染料,DNA扩增的过程中,荧光染料特异性地掺入DNA双链,发射荧光信号,随着反应的进行,荧光强度逐渐增强,并且可以实时测量。如果你要扩增你的目标样品40个循环,在最后一个循环结束时检测到的荧光会比...
解析 主要就是northern-blot和RT-PCR.RT-PCR不能分析mRNA的长度和表达丰度. 结果一 题目 检测DNA有没有转录出mRNA有那些方法,其中RT-PCR有什么缺点 答案 主要就是northern-blot和RT-PCR.RT-PCR不能分析mRNA的长度和表达丰度. 相关推荐 1 检测DNA有没有转录出mRNA有那些方法,其中RT-PCR有什么缺点 ...
1.PCR，通常指的是普通PCR，以双链DNA为模板，以dNTP为底物，定性扩增双链DNA。2.qPCR和Real-time PCR，指的是实时荧光定量PCR，以cDNA为模板，以dNTP 为底物，对扩增出的DNA进行定量分析。3.RT-PCR，指的是逆转录PCR，以由mRNA逆转录成的cDNA为模板，以dNTP 为底物，进行DNA的扩增，属于PCR的...