污染和假阳性问题:RT-PCR实验过程中,由于操作复杂且涉及多个步骤,容易引入污染,如DNA污染、RNA酶污染等。这些污染可能导致假阳性结果的出现,影响实验的准确性和可靠性。此外,如果引物设计不当或反应条件控制不严,也可能导致非特异性扩增,进一步增加假阳性的风险。 灵敏度与特异性的平衡:虽然RT-PCR具有高灵敏度的特点...
- 缺点：交互反应发生的机率较高。双抗体夹心法（Sandwich ELISA）- 优势：高灵敏、高专一性，抗原无须事先纯化。- 缺点：抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。竞争法（Competitive ELISA）- 优势：可适用比较不纯的样本，而且数据再现性很高。- 缺点：整体的敏感性和专一性都较差。最新ELISA技术 -...
(2)实时荧光定量反转录PCR(Real-time RT-PCR,RT-qPCR) 实时荧光定量反转录PCR(Real-time RT-PCR,RT-qPCR)是qPCR和RT-PCR的组合,所以RT-qPCR(也有人写成qRT-PCR)是结合了荧光定量技术的反转录PCR,即以mRNA或总RNA为模板,先反转录得到cDNA,再以cDNA为模板,通过荧光定量PCR进行定量检测分析(RT-PCR只可以定性...
普通PCR用于扩增DNA片段,逆转录PCR用于从RNA转录成DNA,而荧光定量PCR可以用来准确测量DNA或RNA的浓度。其次,还有特定领域中常用的PCR分类,如实时荧光PCR、多重PCR和数字PCR。实时荧光PCR可以实时监测PCR反应的进行,多重PCR可以同时扩增多个目标序列,而数字PCR则可以准确计算样本中目标序列的拷贝数。在分子生物学和医学研...
两步法 RT-PCR有哪些优缺点?,本视频由ELISA检测试剂盒抚生提供,0次播放,好看视频是由百度团队打造的集内涵和颜值于一身的专业短视频聚合平台
优点：1.中间产物 cDNA 能够建立可以长期保存，并用于多次反应的稳定的cDNA库;2. 通过oligo dT和随机引物，可以从单个RNA样本中扩增多个靶标，而不需要多重cDNA库;3. 方便对下游条件优化调整，灵活性强;4. 试验成本低。缺点：1. 更多的移液步骤会增加DNA污染的风险，并且耗时;2. 相较于一步法，需要进行更多的...
RT-PCR(real-timepcr)在检测细胞的凋亡中与其他方法相比有何优缺点RT-PCR(real-timepcr)在检测细胞的凋亡中与其他方法相比有何优缺点病情描述:做视网膜中bcl-2和bax两个因子用TR-PCR和其它的方法比如免疫组化相比有何优缺点,多说一点优点。专家意见:RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相...
解析 主要就是northern-blot和RT-PCR.RT-PCR不能分析mRNA的长度和表达丰度. 结果一 题目 检测DNA有没有转录出mRNA有那些方法,其中RT-PCR有什么缺点 答案 主要就是northern-blot和RT-PCR.RT-PCR不能分析mRNA的长度和表达丰度. 相关推荐 1 检测DNA有没有转录出mRNA有那些方法,其中RT-PCR有什么缺点 ...
染料法和探针法荧光定量PCR(RT-qPCR)的优缺点比较 一、荧光染料法(SYBR Green) 其原理是:在PCR反应体系中加入过量荧光染料,DNA扩增的过程中,荧光染料特异性地掺入DNA双链,发射荧光信号,随着反应的进行,荧光强度逐渐增强,并且可以实时测量。如果你要扩增你的目标样品40个循环,在最后一个循环结束时检测到的荧光会比...