1.PCR,通常指的是普通PCR,以双链DNA为模板,以dNTP为底物,定性扩增双链DNA。 2.qPCR和Real-time PCR,指的是实时荧光定量PCR,以cDNA为模板,以dNTP 为底物,对扩增出的DNA进行定量分析。 3.RT-PCR,指的是逆转录PCR,以由mRNA逆转录成的cDNA为模板,以dNTP 为底物,进行DNA的扩增,属于PCR的变种,结果只能定性,不...
当探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，以至于无法检测到荧光信号；而当PCR扩增时（在延伸阶段），探针会被Taq酶的5'→3'外切酶活性酶切降解，使报告基团和淬灭基团分离，报告基团发射底的荧光不会再被吸收，从而可以在荧光监测系统接收到荧光信号，即每扩增一条DNA，就形成一个荧光分子，PCR产物的形成...
缺点：1. 更多的移液步骤会增加DNA污染的风险，并且耗时;2. 相较于一步法，需要进行更多的优化。
普通PCR用于扩增DNA片段,逆转录PCR用于从RNA转录成DNA,而荧光定量PCR可以用来准确测量DNA或RNA的浓度。其次,还有特定领域中常用的PCR分类,如实时荧光PCR、多重PCR和数字PCR。实时荧光PCR可以实时监测PCR反应的进行,多重PCR可以同时扩增多个目标序列,而数字PCR则可以准确计算样本中目标序列的拷贝数。在分子生物学和医学研...
在RT-PCR 实验中，选择总RNA或纯化的mRNA作为模板进行逆转录十分重要。mRNA虽然能提供略高的灵敏度，但总RNA经常使用，具有较mRNA更重要的优势。第一，其过程需要较少的纯化流程，这保证了更好的回收模板和更好的把结果标准化为起始的细胞数。第二，避免mRNA富集步骤，为了避免不同mRNA的回收率而带来结果偏移的可能...
RT-PCR（反转录PCR）试剂盒是一种将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术工具。以下是对其优点和缺点的详细分析：优点 高灵敏度：RT-PCR技术能够检测到极低浓度的RNA样品，使得微量RNA的分析成为可能。高灵敏度有助于早期发现和诊断病毒感染或其他RNA相关的疾病。高特异性：通过设计特定的...
RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,逆转录聚合酶链式反应)虽然具有许多优点,但也存在一些缺点。以下是RT-PCR技术的一些主要缺点: 污染和假阳性问题:RT-PCR实验过程中,由于操作复杂且涉及多个步骤,容易引入污染,如DNA污染、RNA酶污染等。这些污染可能导致假阳性结果的出现,影响实验的准确性和可靠性...
染料法和探针法荧光定量PCR（RT-qPCR）的优缺点比较 一、荧光染料法(SYBR Green)其原理是：在PCR反应体系中加入过量荧光染料，DNA扩增的过程中，荧光染料特异性地掺入DNA双链，发射荧光信号，随着反应的进行，荧光强度逐渐增强，并且可以实时测量。如果你要扩增你的目标样品40个循环，在最后一个循环结束时检测到的...
一步法RT-PCR: 这种方法的优点是简单快速,不需要储存cDNA。 样本量多时,只需扩增少数几个目的片段。 可以减少污染的风险和RNA二级结构的影响。 缺点是灵敏性相对较弱,单一样品检测的靶点较少。 两步法RT-PCR: 先在反转录酶的作用下生成cDNA,再用cDNA进行PCR扩增。 需要储存cDNA,每个样本需扩增多个短片段。 cDNA...