RT-PCR的核心步骤包括从组织或细胞中提取总RNA,并以其中的mRNA作为模板。通过使用Oligo(dT)或随机引物,利用逆转录酶将mRNA反转录成cDNA。然后,以生成的cDNA为模板进行PCR扩增,从而获得目的基因或检测基因表达。 🧪 操作流程 提取RNA:从组织或细胞中提取总RNA,这是RT-PCR的第一步。 逆转录:使用Oligo(dT)或随机...
实时定量PCR(RT-qPCR)实验操作流程 一. RT-qPCR 基本原理和概念实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,...
在进行RT-PCR实验之前,你需要准备以下试剂:0.1% DEPC 溶液、Trizol、氯仿、异丙醇、DEPC 水配制的75%乙醇、无 RNase-free 的纯水、反转录试剂盒、dNTP mix、Taq 酶、buffer 和凝胶电泳缓冲液等。🧬 仪器和耗材 你需要以下仪器和耗材:Thermo Scientific 全波长扫描式多功能读数仪、Thermo Scientific Arktik PCR 仪...
将PCR试管放入到PCR仪上。 ②设置PCR反应条件。 PCR反应中的温度要根据具体反应而定,一般来说每分钟合成10bp左右 ③进行第二轮PCR反应,在0.25ml的PCR管中,分别加入: 10×PCR缓冲液 5ul 第一轮PCR产物 5ul 2.5mmol/L的dNTP混合液 1 ul Taq dNA聚合酶(5U/1) 0.5l 10ymol/L的外引物(P3、P4) 各1pH2O...
师姐详解从PCR到qPCR实验流程(详解) 实时定量PCR(RT-qPCR)是一种利用荧光化学物质在每个聚合酶链式反应(PCR)循环后测量产物总量的方法,广泛应用于特定DNA序列的定量分析。以下是RT-qPCR的实验操作流程: 🔬 实验原理:Real-time PCR通过荧光信号实时监测PCR进程。在指数扩增阶段,模板的Ct值与起始拷贝数之间存在线性...
在进行RT-PCR实验时,务必佩戴口罩和手套,避免其他人员干扰。RT试剂盒从冰箱取出后,需充分解冻并瞬离,然后混匀,放于冰上。为避免漏加或错加试剂,可以使用数字贴纸进行编号。2. 试剂操作 🧼 取用不同试剂时,必须更换枪头,以防止样本之间的交叉污染。逆转录时,PCR仪可提前预热。反应体系配好后,需充分混匀并瞬...
RealTime RT-PCR实验流程 1.样本Total RNA提取-Trizol法提取组织、细胞Total RNA (1)样本处理(细菌、细胞不用研磨); 在铝箔中将1cm2大小左右的组织样本敲碎,移至已加入钢珠的Eppendorf管中,使用研磨仪(30 1/s,8min)进行研磨; 注:此步操作应尽可能在低温液氮环境下操作,细菌、细胞样本不用研磨。 (2)在研磨...
RT-PCR实验的基本原理是提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,利用Oligo(dT)或随机引物通过逆转录酶将其反转录成cDNA。然后以cDNA为模板进行PCR扩增,从而获得目的基因或检测基因表达。 📝 实验步骤 提取RNA:从组织或细胞中提取总RNA,这是RT-PCR的第一步。 反转录:使用Oligo(dT)或随机引物,在逆转录酶...
反转录聚合酶链反应RT-PCR实验-总RNA提取流程(上)发布于 2024-05-21 11:07・IP 属地湖北 · 175 次播放 赞同添加评论 分享收藏喜欢 举报 核糖核酸(RNA)PCR(聚合酶链式反应)生物学分子生物学生物实验科研试剂 写下你的评论... 还没有评论,发表第一个评论吧...