下面将介绍RT-PCR的操作流程。 首先,准备实验所需的试剂和设备,包括RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒、PCR试剂盒、热循环仪等。确保所有试剂和设备都处于干净、无菌状态。 第二步是提取RNA样本。将待检测的样本(如血液、组织等)加入RNA提取试剂盒中,按照试剂盒说明书的指导进行RNA提取。提取后的RNA样本应该是纯净的,...
1.实验前的准备 1.1实验器具的准备:RT-PCR所用的500μl和200μl薄壁EP管、移液器吸嘴最好用进口的,因为进口EP管、移液器吸嘴已经去除了RNasin,也已经灭菌处理过,可以直接用。实验前用干净的镊子夹取出EP管、移液器吸嘴插好备用,注意镊子不要碰到EP管内壁和吸嘴的尖部。如果用国产500μl和200μlEP...
Rt-PCR实验操作步骤 RT-PCR实验操作步骤 (转) 默认分类2007-12-25 17:51:05阅读233评论1字号:大中小订阅 一.所用试剂 1.0.01MPBS缓冲液,PH7.4 :高压灭菌,40C保存。临用前-200C放置30分钟,确保冰冷。 2.焦碳酸二乙酯(DEPC):sigma公司,40C保存。 3.0.1%DEPC处理的灭菌去离子水:100ml去离子水中加入0.1...
1 1.1%琼脂糖凝胶电泳记录结果。与DNA Marker相比,观察被检样品管的扩增产物位置,如与预期大小一致,且空白对照管中无扩增条带,说明本实验获得的条带与预期靶片段大小相符。2 2.此方法的优点是可以由少量的mRNA(从1~2个哺乳动物细胞提取的mRNA)构成cDNA文库,RT-PCR可使所需模板的mRNA量大大减少。
统计分析:打开graphpad 输入三次实验的数据,这里没有实验数据,就随便填写了几个 输入数据后,点击Analyze,对实验数据进行统计学分析,选择适合自己实验的统计学方法 另外,点击Graphs可以绘制图片 至此,RT-PCR实验流程基本走完。
细胞RT-PCR操作流程 实验流程 一、取RNA: 1、 处理细胞: (1) 贴壁细胞:先用无菌DEPC水配制的PBS洗细胞两次,弃尽PBS后,直接向培养瓶中加入1ml Trizol,通过溶解细胞,通过移液管分次移出细胞裂解物。当Trizol量不足,可导致RNA中有DNA污染。 (2) 悬浮细胞:先用无菌DEPC水配制的PBS洗细胞,通过离心沉淀细胞,在...
得到的 RT 反应液加入到下一步的 Real Time PCR 反应体系中,其加入量不要超过Real Time PCR 反应体积的 1/10(V/V)量。 Real Time PCR : 1.反应体系的配制 本实验室用的是大连宝生物的产品:TB Green® Premix Ex Taq™ II (Tli RNaseH Plus), Bulk。
精品文档。1欢迎下载RT-PCR全过程步骤一.试剂材料准备1、塑料制品:(包括枪头、EP管、匀浆管等)先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中,将塑料制品逐个浸泡其中,其中小枪头需要吸管打入DEPC水,过夜,然后高压,再烤干备用,实验前将枪头等放入吸头台,再高压一次(EP管)2、玻璃制品:泡酸过夜,冲洗干净,蒙锡纸烤干备用(...
4. RT-PCR原理及应用是如何做好实验之PCR实验操作的第4集视频,该合集共计16集,视频收藏或关注UP主,及时了解更多相关视频内容。