3 实时荧光定量 PCR (qPCR)实时荧光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR) 是 DNA 的实时 PCR 扩增，通过荧光探针测量，最常见的是插入染料或基于水解的探针，从而实现 PCR 产物的定量 (见图 2)。该技术常用于检测病原体的存在和确定感兴趣的 DNA 序列的拷贝数。图 2. qPCR 流程图[11]。同样要经过...
bDNA和RT-qPCR平台对血浆中LNP-mRNA的定量有方法学性能的差异。由于血浆中内源性mRNA含量很低,RT-qPCR检测样品预处理使用直接裂解法,再进行逆转录和qPCR步骤。bDNA检测使用的是基于测量内源性mRNA曾用方法的修改。具体两种方法的流程如图2所示。 图2. RT-qPCR方法和bDNA方法对血浆中的LNP-mRNA(EGFP mRNA)进行定...
此外,一种将 RT-PCR 与 qPCR 相结合的技术,逆转录定量实时 PCR(Reverse transcription quantitative real-time PCR, RT-qPCR)。通过在 qPCR 反应中使用 cDNA 来测量 RNA 水平,从而可以快速检测基因表达变化 (图 4B)。 图4. RT-PCR 和 RT-qPCR 流程图[11]。 (A) RT-PCR 工作流程。分离 RNA,通过逆转录 ...
此外,一种将 RT-PCR 与 qPCR 相结合的技术,逆转录定量实时 PCR(Reverse transcription quantitative real-time PCR, RT-qPCR)。通过在 qPCR 反应中使用 cDNA 来测量 RNA 水平,从而可以快速检测基因表达变化 (图 4B)。 图4. RT-PCR 和 RT-qPCR 流程图[11]。 (A) RT-PCR 工作流程。分离 RNA,通过逆转录 ...
实时荧光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)是 DNA 的实时 PCR 扩增,通过荧光探针测量,最常见的是插入染料或基于水解的探针,从而实现 PCR 产物的定量(见图 2)。该技术常用于检测病原体的存在和确定感兴趣的 DNA 序列的拷贝数。 图2. qPCR 流程图[11]。 同样要经过多个扩增循环,其中模板 DNA 最初...
MammaTyper RT-qPCR与IHC检测乳腺癌ER/PR/Ki67/HER2-low之间显示出高度一致性。 目前,尽管多基因检测技术在乳腺癌的诊断和治疗中扮演着越来越重要的角色,但对于这些多基因测试与免疫组织化学(IHC)结果之间相关性的数据仍然相对有限。而深入探索多基因检测结果与IHC结果之间的一致性,对于提高乳腺癌的诊断准确性、优化治...
实时荧光定量 PCR (Quantitative Real-time PCR, qPCR) 是 DNA 的实时 PCR 扩增,通过荧光探针测量,最常见的是插入染料或基于水解的探针,从而实现 PCR 产物的定量 (见图 2)。该技术常用于检测病原体的存在和确定感兴趣的 DNA 序列的拷贝数。 图2. qPCR 流程图[11]。
图2. qPCR 流程图[11]。 同样要经过多个扩增循环,其中模板 DNA 最初变性,然后是针对特定序列的寡核苷酸引物的退火,随后通过耐热 DNA 聚合酶从每个退火引物延伸互补链,导致扩增子数量在 PCR 期间呈指数增长,扩增子数量的增加是在 PCR 过程中通过荧光报告基因检测“实时”记录的。
实时荧光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)是 DNA 的实时 PCR 扩增,通过荧光探针测量,常见的是插入染料或基于水解的探针,从而实现 PCR 产物的定量(见图 2)。该技术常用于检测病原体的存在和确定感兴趣的 DNA 序列的拷贝数。 图2. qPCR 流程图[11]。
使用正百分比一致性(PPA)、负百分比一致性(NPA)和总体百分比一致性(OPA)以及Cohen's kappa统计量来评估MammaTyper RT-qPCR与IHC检测方法在ER、PR、HER2和Ki67表达判读上的一致性。特别关注HER2低表达肿瘤的分类,并分析Ki67的全局和热点表达。 图1.研究设计流程图...