此外，一种将 RT-PCR 与 qPCR 相结合的技术，逆转录定量实时 PCR(Reverse transcription quantitative real-time PCR, RT-qPCR)。通过在 qPCR 反应中使用 cDNA 来测量 RNA 水平，从而可以快速检测基因表达变化 (图 4B)。图 4. RT-PCR 和 RT-qPCR 流程图[11]。(A) RT-PCR 工作流程。分离 RNA，通过逆转...
由于血浆中内源性mRNA含量很低,RT-qPCR检测样品预处理使用直接裂解法,再进行逆转录和qPCR步骤。bDNA检测使用的是基于测量内源性mRNA曾用方法的修改。具体两种方法的流程如图2所示。 图2. RT-qPCR方法和bDNA方法对血浆中的LNP-mRNA(EGFP mRNA)进行定量分析实验流程图 本次实验使用商品化的LNP-mRNA(编码EGFP)进行...
(3) PCR 扩增:以合成的 cDNA 为模板进行 PCR 或 qPCR 实验。(RT-qPCR 分一步法 RT-qPCR 和两步法 RT-qPCR 两种)。 (4) 产物分析:通过琼脂糖凝胶电泳 (RT-PCR) 或荧光信号 (RT-qPCR) 分析扩增效果。 此外,一种将 RT-PCR 与 qPCR 相结合的技术,逆转录定量实时 PCR(Reverse transcription quantitative ...
实时荧光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)是 DNA 的实时 PCR 扩增,通过荧光探针测量,最常见的是插入染料或基于水解的探针,从而实现 PCR 产物的定量(见图 2)。该技术常用于检测病原体的存在和确定感兴趣的 DNA 序列的拷贝数。 图2. qPCR 流程图[11]。 同样要经过多个扩增循环,其中模板 DNA 最初...
(A) RT-PCR 工作流程。分离 RNA,通过逆转录 (RT) 生成 cDNA; 然后进行 PCR 以扩增感兴趣的区域。(B) RT-qPCR 程序。在开始 qPCR 程序之前,分离 RNA 并生成 cDNA。 注:RNA 质量至关重要!!!OD260/280=1.9-2.1 的 RNA 才 "优秀" 。 此外,选择合适的内参(或内标)是非常重要的,这关系到实验结果的准确...
实时荧光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR) 是 DNA 的实时 PCR 扩增,通过荧光探针测量,最常见的是插入染料或基于水解的探针,从而实现 PCR 产物的定量 (见图 2)。该技术常用于检测病原体的存在和确定感兴趣的 DNA 序列的拷贝数。 qPCR 流程图[11]。
(A) RT-PCR 工作流程。分离 RNA,通过逆转录 (RT) 生成 cDNA; 然后进行 PCR 以扩增感兴趣的区域。(B) RT-qPCR 程序。在开始 qPCR 程序之前,分离 RNA 并生成 cDNA。 注:RNA 质量至关重要!!!OD260/280=1.9-2.1 的 RNA 才 "优秀" 。 此外,选择合适的内参 (或内标) 是非常重要的,这关系到实验结果的...
实时荧光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)是 DNA 的实时 PCR 扩增,通过荧光探针测量,常见的是插入染料或基于水解的探针,从而实现 PCR 产物的定量(见图 2)。该技术常用于检测病原体的存在和确定感兴趣的 DNA 序列的拷贝数。 图2. qPCR 流程图[11]。
实时荧光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)是 DNA 的实时 PCR 扩增,通过荧光探针测量,最常见的是插入染料或基于水解的探针,从而实现 PCR 产物的定量(见图 2)。该技术常用于检测病原体的存在和确定感兴趣的 DNA 序列的拷贝数。 图2. qPCR 流程图[11]。
图1. 实验流程图 表1. HiScript®II 两步法RT-PCR/qPCR系列试剂盒选择指南。 组分说明: 组分 R233-01 100 rxn (20μl/rxn) RNase free ddH2O 2×1 ml 4× gDNA wiper Mix 400 μl 5× HiScript®II Select qRT SuperMix IIa 400 μl ...