在ABI荧光定量PCR仪专用96孔板中建立qPCR反应体系,反应程序为两步法。反应程序为两步法如下表: 4、RT-qPCR统计:每个基因在不同组别中的表达在获得3个重复的Ct值后,从ABI系统中拷贝原始数据,挑出“Ct SD”值大于0.5的组别(需重新实验),求出各个组的管家基因GAPDH的均值(一般相差1个Ct值以内),再依次求出实验组...
RT—PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平、细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA，关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT及基因特异性引物中的一种...