2. 制备的RNA必须不含RT-qPCR抑制剂,例如有机溶剂等。 3. 尽量减少RNA样品的冻融次数,同时避免RNA酶污染,以减少RNA降解的风险。(RNA降解会极大地限制了RT-qPCR反应的性能) 4. 样本制备过程中,注意避免其他DNA的污染,DNA的干扰也会降低qPCR的准确性。 建议采用商品化的RNA提取试剂盒预先处理待检物(如拭子、活...
RT-qPCR:逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)是一种结合了逆转录PCR和实时定量PCR的技术,可以对RNA分子进行定量分析。RT-qPCR先通过反转录酶将RNA逆转录成cDNA,然后利用qPCR技术对cDNA进行定量分析。RT-qPCR技术广泛应用于RNA表达水平的研究,如基因表达分析、病毒载量检测等。 总之,PCR、qPCR、RT-PCR和RT-qPCR...
微阵列技术与RT-qPCR相比可以处理更多的样本,比但由于执行和分析数据所需的复杂性和时间的增加,这种方法的流行度正在下降,2016年PubMed搜索“微阵列”一词大约有1600个引用。 04 RNA-seq是所有RNA profiling方法中技术最复杂、最昂贵、最耗时的一种,使得复制或重复实验的...
我们分析了来自Tempus管和细胞制备管(CPT)的全血RNA——从46名受试者中收集的PBMC RNA,并使用geNorm和NormFinder算法来选择最稳定的参考基因。磷酸甘油酸激酶1(PGK1)是全血和PBMC RNA的最佳标准化基因之一,然而,两种样本类型的额外基因不同;核糖体蛋白大,P0(RPLP0)用于...
RT-PCR:逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)是一种把RNA分子转录为cDNA后,在体外进行DNA扩增的技术。RT-PCR技术结合了反转录和PCR两个步骤,主要用于RNA分子的扩增和检测,如基因转录水平分析、miRNA表达研究等。 RT-qPCR:逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)是一种结合了逆转录PCR和实时定量PCR的技术,可以对RNA分子...
RT-qPCR包括三大步骤:RNA的提取与质量检测、逆转录成cDNA、以及实时荧光定量PCR实验。通过RT-qPCR实验,可以合成cDNA探针、获取目的基因、以及分析基因的转录水平。 RNA的提取与质量检测 从细胞、组织等样本中提取出RNA后,需要对提取的RNA的纯度、浓度、以及完整性进行评估,质检达标后才能进行后续的实验。一般需要通过紫外...
RNA-seq是所有RNA profiling方法中技术最复杂、最昂贵、最耗时的一种,使得复制或重复实验的可行性较低。 05 另外两种中等通量的RNA分析方法是NanoString公司的nCounter分析系统和Thermo Fisher公司的OpenArray系统。前者的优点是不需要RT步骤,后者减少了所需的样品处理量。比较两种技术和RT- qPCR的mRNA丰度分析发现,三种...
当比较早产和足月新生儿和成人的样本时,由GAPDH和PPIB或ACTB和GAPDH组成的归一化因子是合适的。然而,除RPLP0外,所有候选参考基因都表现出显著的组间基因表达差异和较高的基因表达,这导致了较小但具有统计学意义的系统偏差。RNA-seq数据的系统分析揭示了具有潜在优越稳定性的新的参考基因候选者。
关于HBV RNA定量检测技术,目前使用最多的主要包括反转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和RNA捕获探针法。 RT-qPCR检测技术 该技术通常采用普通磁珠法提取血清样本或者血浆样本中的总核酸(包含HBV RNA和HBV DNA),经DNA酶消化去除HBV DNA的干扰,以获得HBV RNA。HBV RNA经逆转录后作为PCR扩增检测模板,利用针对HBV RNA序...
一、RT-qPCR中模板的选择在RT-PCR 实验中,选择总RNA或纯化的mRNA作为模板进行逆转录十分重要。mRNA虽然能提供略高的灵敏度,但总RNA经常使用,具有较mRNA更重要的优势。▌第一,其过程需要较少的纯化流程,这保证了更好的回收模板和更好的把结果标准化为起始的细胞数。