(2)过程Ⅱ首先要将反应体系的温度升高到95 ℃,其目的是让逆转录酶变性失活、使mRNA-cDNA杂合双链解开,该反应体系中所用的Taq DNA聚合酶至少应能耐受95 ℃高温。(3)过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增,理论上至少需要2n-1个引物B。(4)RT-PCR过程中主要借助对温度的控制,影响酶的活性,从而使得化学反应有...
下面是RT-PCR的基本步骤和一些需要注意的事项。 步骤 1.提取RNA:RT-PCR的第一步是从样品中提取RNA。常见的方法包括酚/氯仿提取法和商用RNA提取试剂盒。 2.逆转录:逆转录是将RNA转录成cDNA的过程。逆转录反应需要逆转录酶和引物。在逆转录反应中,RNA被逆转录酶逆转录为单链cDNA。 3.退火:将逆转录产生的单链...
RT-PCR过程:1、mRNA,引物和逆转录酶以及恰当缓冲体系在70C5min,生成相应cDNA。2、dNTP,DNA聚合酶,引物,恰当缓冲体系,37C1h,而后95C5min灭活反映体系中其她杂质,4C保存。 24试述肿瘤发生机理。 答:1、癌基因(原癌基因)异常表达。2、抑癌基因失活,会对癌基因异常表达失去抑制作用。3细胞在增殖...
[解析](1)过程①是逆转录过程,操作时需要加入缓冲液、原料、模板(RNA提取物)、酶(逆转录酶)和引物A等。 (2)过程②将反应体系的温度升高到95℃的目的是让逆转录酶变性失活,同时使mRNA﹣cDNA杂合双链解开。接下来所用的TaqDNA聚合酶至少应能耐受95℃高温。 (3)决定RT﹣PCR扩增片段的是引物A和引物B上的核苷...
RT-PCR全过程步骤RT—PCR全过程步骤 一.试剂材料准备 1、塑料制品:(包括枪头、EP管、匀浆管等) 先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中,将塑料制品逐个浸泡其中,其中小枪头需要吸管打入DEPC水,过夜,然后高压,再烤干备用,实验前将枪头等放入吸头台,再高压一次(EP管) 2、玻璃制品:泡酸过夜,冲洗干净,蒙锡纸烤干...
故选:BCD。 1、PCR原理:在解旋酶作用下,打开DNA双链,每条DNA单链作为母链,以4中游离脱氧核苷酸为原料,合成子链,在引物作用下,DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链,即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的.实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程.DNA的复制需要引物,其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端...
荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) ，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。分子生物学研究 1 核酸定量分析。 对传染性疾病进行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的...
RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录，要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质。常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞病毒（avian myeloblastosis virus，AMV）反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒（moloney murine leukemia virus，MMLV）反转录酶。在完成逆转录过程之后，通过PCR进行定量分析的时候，随着技术的...