(2)过程Ⅱ首先要将反应体系的温度升高到95 ℃,其目的是让逆转录酶变性失活、使mRNA-cDNA杂合双链解开,该反应体系中所用的Taq DNA聚合酶至少应能耐受95 ℃高温。(3)过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增,理论上至少需要2n-1个引物B。(4)RT-PCR过程中主要借助对温度的控制,影响酶的活性,从而使得化学反应有...
RT-PCR过程:1、mRNA,引物和逆转录酶以及适当的缓冲体系在70C5min,生成相应的cDNA。2、dNTP,DNA聚合酶,引物,适当的缓冲体系,37C1h,而后95C5min灭活反应体系中的其他杂质,4C保存。 24试述肿瘤的发生机理。 答:1、癌基因(原癌基因)的异常表达。2、抑癌基因的失活,会对癌基因的异常表达失去抑制作用。3细胞在增...
故选:BCD。 1、PCR原理:在解旋酶作用下,打开DNA双链,每条DNA单链作为母链,以4中游离脱氧核苷酸为原料,合成子链,在引物作用下,DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链,即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的.实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程.DNA的复制需要引物,其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端...
RT—PCR全过程步骤 一.试剂材料准备 1、塑料制品:(包括枪头、EP管、匀浆管等) 先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中,将塑料制品逐个浸泡其中,其中小枪头需要吸管打入DEPC水,过夜,然后高压,再烤干备用,实验前将枪头等放入吸头台,再高压一次(EP管) 2、玻璃制品:泡酸过夜,冲洗干净,蒙锡纸烤干备用(DEPC水泡)(洗净...
试验步骤: 1. RNA提取(略参见RNA实验技术版块) 2. cDNA的合成: 50ul PCR体系: 10×PCRbuffer 5ul MgCl2 3ul(2.0mM) 10mMdNTPs 1ul sense primer 1ul(1umol/l) antisense primer 1ul(1umol/l) cDNA 1.5ul DEPC处理水 36.7ul Taq 酶 0.8ul ...
1、PCR全称为聚合酶链式反应,是在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。其原理是DNA的复制。 2、PCR的条件有模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶(Taq酶)。 3、PCR共包括三步:①高温变性:DNA解旋过程(PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶,高温条件下氢键可自动解开);②低温复性:引物结合到互补链DNA...
三、PCR技术是基于DNA/cDNA为摸板的扩增过程 PCR技术的基本原理:类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与...
[解析](1)过程①是逆转录过程,操作时需要加入缓冲液、原料、模板(RNA提取物)、酶(逆转录酶)和引物A等。 (2)过程②将反应体系的温度升高到95℃的目的是让逆转录酶变性失活,同时使mRNA﹣cDNA杂合双链解开。接下来所用的TaqDNA聚合酶至少应能耐受95℃高温。 (3)决定RT﹣PCR扩增片段的是引物A和引物B上的核苷...
①原理:RT-PCR为逆转录PCR或者称反转录PCR,是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。 ②过程:预变性,破坏DNA中可能存在的较难破坏的二级结构,使DNA充分变性,减少DNA 复杂结构对扩增的影响,以利于引物更好的和模板结合,特别是对于...