RT- PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应相结合的技术,具体过程如下图所示:(1)过程Ⅰ需要加入缓冲液、原料、 、
RT-PCR过程:1、mRNA,引物和逆转录酶以及适当的缓冲体系在70C5min,生成相应的cDNA。2、dNTP,DNA聚合酶,引物,适当的缓冲体系,37C1h,而后95C5min灭活反应体系中的其他杂质,4C保存。 24试述肿瘤的发生机理。 答:1、癌基因(原癌基因)的异常表达。2、抑癌基因的失活,会对癌基因的异常表达失去抑制作用。3细胞在增...
先将1-10μl左右PCR产物,加已点在纸上的溴酸兰,反复吸打混匀后进行电泳,一般电流为10mA,电源100V,电泳30分钟,紫外灯下观察。 注意事项: 1、 逆转录的关键步骤是立即冰水浴。 2、 Rt时,先打开PCR预热30分钟。 3、 RNA抽提前,打开离心机预冷。 4、 在所有RNA实验中,最关...
不晓得你说的是RT-PCR(reverse transcription PCR)呢,还是实时PCR(real-time PCR).如果是反转录的话,步骤如下:1.电泳定量RNA或直接测定RNA浓度.2.反转录体系:(20 μl)RNA+DEPC 水:11μl,RNA量1-5μgOligo dT:1μl 5X RTase Buffer:4μl (10X RTase Buffer 2μl + 2μl DEPC 水)Ribololck Rnase...
①原理:RT-PCR为逆转录PCR或者称反转录PCR,是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。 ②过程:预变性,破坏DNA中可能存在的较难破坏的二级结构,使DNA充分变性,减少DNA 复杂结构对扩增的影响,以利于引物更好的和模板结合,特别是对于...
1、PCR全称为聚合酶链式反应,是在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。其原理是DNA的复制。2、PCR的条件有模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶(Taq酶)。3、PCR共包括三步:①高温变性:DNA解旋过程(PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶,高温条件下氢键可自动解开);②低温复性:引物结合到互补链DNA上;...
解析:(1)过程①是逆转录过程,操作时需要加入缓冲液、原料、模板(RNA提取物)、酶(逆转录酶)和引物A等。(2)过程②将反应体系的温度升高到95 ℃的目的是让逆转录酶变性失活,同时使mRNA—cDNA杂合双链解开。接下来所用的Taq DNA聚合酶至少应能耐受95 ℃高温。(3)决定RT-PCR扩增片段的是引物A和引物B上的核苷酸...
RT-PCR是以提取的RNA为模板,经反转录获得与之互补的DNA(cDNA)序列,再以cDNA序列为模板进行目的片段的扩增。具体过程如图所示。以下有关RT-PCR的叙述正确的是( )A. 过程1需要使用耐高温的DNA聚合酶 B. 过程2中的引物B可与mRNA互补配对 C. 游离的脱氧核苷酸只能加到引物的5'端 D. RT-PCR可用于对RNA病毒的...