(2)过程Ⅱ首先要将反应体系的温度升高到95 ℃,其目的是让逆转录酶变性失活、使mRNA-cDNA杂合双链解开,该反应体系中所用的Taq DNA聚合酶至少应能耐受95 ℃高温。(3)过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增,理论上至少需要2n-1个引物B。(4)RT-PCR过程中主要借助对温度的控制,影响酶的活性,从而使得化学反应有...
RT-PCR过程:1、mRNA,引物和逆转录酶以及适当的缓冲体系在70C5min,生成相应的cDNA。2、dNTP,DNA聚合酶,引物,适当的缓冲体系,37C1h,而后95C5min灭活反应体系中的其他杂质,4C保存。 24试述肿瘤的发生机理。 答:1、癌基因(原癌基因)的异常表达。2、抑癌基因的失活,会对癌基因的异常表达失去抑制...
先将1-10μl左右PCR产物,加已点在纸上的溴酸兰,反复吸打混匀后进行电泳,一般电流为10mA,电源100V,电泳30分钟,紫外灯下观察。 注意事项: 1、 逆转录的关键步骤是立即冰水浴。 2、 Rt时,先打开PCR预热30分钟。 3、 RNA抽提前,打开离心机预冷。 4、 在所有RNA实验中,最关...
RT—PCR全过程步骤 一.试剂材料准备 1、塑料制品:(包括枪头、EP管、匀浆管等) 先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中,将塑料制品逐个浸泡其中,其中小枪头需要吸管打入DEPC水,过夜,然后高压,再烤干备用,实验前将枪头等放入吸头台,再高压一次(EP管) 2、玻璃制品:泡酸过夜,冲洗干净,蒙锡纸烤干备用(DEPC水泡)(洗净...
故选:BCD。 1、PCR原理:在解旋酶作用下,打开DNA双链,每条DNA单链作为母链,以4中游离脱氧核苷酸为原料,合成子链,在引物作用下,DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链,即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的.实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程.DNA的复制需要引物,其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端...
2.0万 1 01:07 App PCR、RT-PCR、qRT-PCR终于能分清了! 5.2万 33 13:34 App RT-qPCR详细步骤 4.5万 2 06:02 App RT-qPCR实验流程 1349 0 08:05 App qpcr逆转录实验步骤 6251 2 20:21 App 【实验方法】 科研基本功|逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)操作方法全过程教学视频 13.6万 566 29:00 App...
三、PCR技术是基于DNA/cDNA为摸板的扩增过程 PCR技术的基本原理:类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与...
[解析](1)过程①是逆转录过程,操作时需要加入缓冲液、原料、模板(RNA提取物)、酶(逆转录酶)和引物A等。 (2)过程②将反应体系的温度升高到95℃的目的是让逆转录酶变性失活,同时使mRNA﹣cDNA杂合双链解开。接下来所用的TaqDNA聚合酶至少应能耐受95℃高温。 (3)决定RT﹣PCR扩增片段的是引物A和引物B上的核苷...
不晓得你说的是RT-PCR(reverse transcription PCR)呢,还是实时PCR(real-time PCR).如果是反转录的话,步骤如下:1.电泳定量RNA或直接测定RNA浓度.2.反转录体系:(20 μl)RNA+DEPC 水:11μl,RNA量1-5μgOligo dT:1μl 5X RTase Buffer:4μl (10X RTase Buffer 2μl + 2μl DEPC 水)Ribololck Rnase...