答:原理:即逆转录PCR,先在逆转录酶的作用下以mRNA为模板合成DNA,再以cDNA为模板进行PCR反应。这样低浓度的mRNA被扩增放大易于检测。是一种快速、简便且敏感性极高的检测RNA的方法,可用于分析基因的转录产物、克隆cDNA及合成cDNA探针、改造cDNA序列等。 RT-PCR过程:1、mRNA,引物和逆转录酶以及适当的缓冲体系在70C5...
①原理:RT-PCR为逆转录PCR或者称反转录PCR,是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。 ②过程:预变性,破坏DNA中可能存在的较难破坏的二级结构,使DNA充分变性,减少DNA 复杂结构对扩增的影响,以利于引物更好的和模板结合,特别是对于...
RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录，要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质。常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞病毒（avian myeloblastosis virus，AMV）反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒（moloney murine leukemia virus，MMLV）反转录酶。在完成逆转录过程之后，通过PCR进行定量分析的时候，随着技术的...
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。作用 RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极...
【实验原理】 聚合酶链式反应PCR过程利用模板变性,引物退火和引物延伸的多个循环来扩增DNA 序列。因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板,是一个指数增长的过程,使其成为检测核酸和克隆基因的一种非常灵敏的技术。 一般经过25-35轮循环就可使模板DNA扩增达106倍。逆转录RT-PCR把以RNA为模板的cDNA合成(即 RNA...
PCR技术的基本原理:类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物...
一、PCR原理和历史 PCR,通常指的是普通PCR,以双链DNA为模板,以dNTP为底物,定性扩增双链DNA。 PCR(Polymerase Chain Reaction),中文全称为聚合酶链式反应,是分子生物学研究中最为广泛应用的技术。在70年代的时候首次报道使用聚合酶及合成引物进行单链DNA的扩增,但直到1983年才正式作为一种研究工具用于DNA的扩增。 19...