PCR作为第一代技术主要用于体外靶基因(DNA序列)扩增和检测;qPCR可以实时定量检测DNA或cDNA的含量;RT-PCR基于mRNA合成的cDNA,实时监测并扩增获得靶基因(DNA序列)用于后续实验,属于PCR二代技术范畴;而qRT-PCR技术是RT-PCR和qPCR的技术结合体,实现mRNA的定量分析。 参考文献: [1] Waters DL, Shapter FM. The polymer...
适用于rRNA、mRNA、tRNA 等所有RNA的反转录反应。主要用于单一模板的RT-PCR反应。 Oligo dT 适用于具有PolyA尾巴的RNA。(原核生物的RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA和tRNA不具有PolyA尾巴。)由 2020-09-07 13:46 News WIKI 相关搜索 RTPCR引物的选择 对靶序列中潜在的引物位点进行分析, 这些位点应该不会...
其中,数字 PCR 芯片包含了 20000 个通孔微结 构,每个通孔都能作为独立的 PCR 反应单元;芯片加样仪可以自动化地实现试剂到 20000 个独立反应孔的均匀分配;ProFlex®PCR 热循环仪包含两块平板热学模块,最多可同时运行 24 片数字 PCR 芯片: QuantStudioTM 3D 芯片阅读仪能够在 1 分钟内完成对单个芯片上 20000...
用于设计PCR引物的规则同样适用于逆转录反应GSP的设计。GSP可以同与mRNA 3"最末端退火的扩增引物序列相同,或GSP可以设计为与反向扩增引物的下游退火。 已经制备好的双链cDNA和一般DNA一样,可以插入到质粒或噬菌体中,为此,首先必需有适当的接头(Linker),接头可以是在PCR引物上增加限制性内切酶识别位点片段,经PCR扩增后...
一般来说,Oligo dT (BIO-38029)因为其可获得mRNA的全长拷贝,应用范围广泛;如果mRNA长度过长>4kb,或者没有polyA尾(原核mRNA或rRNA),建议是选择使用随机引物 (BIO-38028);最后一个基因特异性引物适用于目的序列已知的情况,仅扩增特定cDNA片段,通常在一步RT-...
PCR程序 三步法：第一步：94℃变性30s；第二步（循环30-35次）：94℃变性30s，55-60℃退火30s，72...
这些规则是使用两步RT-PCR(其中一个RT反应的产物被用作多个PCR反应的模板)对RNA进行相对定量,用SYBR Green检测基因特异性PCR产物,以及在比较样品之前用参考基因对测试基因的转录物水平进行标准化。 进一步的细节可以在其他地方找到[1,2]。这些规则中的大部分也适用于采用序列特异性荧光探针的相对定量方法,如TaqMan探针...
一、RT-PCR原理 RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和以cDNA为模板的聚合酶链式反应(PCR)相结合的技术。整个反应过程分为两步,第一步是经反转录酶的作用,从RNA合成cDNA的过程;第二步是以cDNA为模板,在DNA聚合酶作用下扩增目的片段的过程。 我们以PrimeScript RT-PCR Kit(Code No.RR014)为例,来看一下RT-PCR反应的...
1.应用范围:RT-PCR主要用于定性分析,即检测目标基因的存在与否。而qPCR不仅可以定性分析,还可以进行定量分析,即准确测定目标基因的表达水平。 2.实验原理:RT-PCR将RNA逆转录成cDNA,然后通过PCR进行扩增。而qPCR在RT-PCR的基础上引入了荧光信号监测系统,可以实时监测PCR反应的进行。 3.准确性:qPCR相比于RT-PCR更加准...