PCR作为第一代技术主要用于体外靶基因(DNA序列)扩增和检测;qPCR可以实时定量检测DNA或cDNA的含量;RT-PCR基于mRNA合成的cDNA,实时监测并扩增获得靶基因(DNA序列)用于后续实验,属于PCR二代技术范畴;而qRT-PCR技术是RT-PCR和qPCR的技术结合体,实现mRNA的定量分析。 参考文献: [1] Waters DL, Shapter FM. The polymer...
一般来说,Oligo dT (BIO-38029)因为其可获得mRNA的全长拷贝,应用范围广泛;如果mRNA长度过长>4kb,或者没有polyA尾(原核mRNA或rRNA),建议是选择使用随机引物 (BIO-38028);最后一个基因特异性引物适用于目的序列已知的情况,仅扩增特定cDNA片段,通常在一步RT-...
1、目的及适用范围 该SOP用来规范RT-PCR的操作。2、主要仪器 PCR仪、掌上小型离心机 3、试剂及配制方法 RT相关试剂盒（SSIII或者AMV）、DEPC水：用将高温烘烤的玻璃瓶（250℃ 3h）装蒸馏水，然后加入0.1%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。4、相关器皿的预处理 所用相关耗材全部使用RNase-Free的制品。...
1、范围 禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测的操作方法,适用于活禽及其产品中禽流感病毒的检测。 2、缩略语 缩略语: 荧光RT-PCR,荧光反转录-聚合酶链反应。 Ct值,每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。 RNA,核糖核酸。 DEPC,焦碳酸乙二酯。 PBs,磷酸盐缓冲盐水。 Taq酶,TaqDNA聚合酶。 3、原理...
RT—PCR技术灵敏且用途广泛,可应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种研究领域。今天小编就带大家来详细了解一下这项技术,感兴趣的老师不要错过哦! 一、RT-PCR原理 RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和以cDNA为模板的聚合酶链式反应(PCR)相结合的技术。整个反应过程分为两步,第一步是经反转录...
禽流感病毒RT-PCR试验方法
适用范围 本标准适用于各级动物疫病预防与控制中心动物疫病检测实验室、动物疫病第三方检测机构、动物疫病诊断试剂生产研发企业及兽医相关高校研究所等机构利用微滴式数字RT-PCR检测方法对动物A型流感病毒核酸的检测。主要内容 本标准规定了动物A型流感病毒微滴式数字RT-PCR检测方法的试剂与耗材、仪器与设备、操作步骤、结果...
建议每20μl反应体系使用0.5μg oligo(dT)。oligo(dT)12-18适用于多数RT-PCR。 基因特异性引物(GSP)对于逆转录步骤是特异性**的引物。GSP是反义寡聚核苷,可以特异性地同RNA目的序列杂交,而不象随机引物或 oligo(dT)那样同所有RNA退火。 用于设计PCR引物的规则同样适用于逆转录反应GSP的设计。GSP 可以同与mRNA...