一、本次RT-PCR实验目的 学习和掌握逆转录、RT-PCR基因扩增技术和操作方法,并深刻理解逆转录、RT-PCR基因扩增技术在功能基因克隆与载体构建过程中的重要性。 二、RT-PCR实验试剂和材料 大肠杆菌DH5a、Trizol试剂、逆转录试剂、PCR相关试剂、PCR产物克隆试剂、氯仿、异丙醇、DEPC水等。 三、实验器材 PCR仪、移液枪...
RT-PCR提取的RNA主要是rRNA,即核糖体RNA,但很少有人用它做些什么,倒是含量较少的mRNA,即信使RNA是中心法则所述的遗传信息表现的中转站,所以我们要把微量的信使RNA弄出来,更重要的是,RNA太容易分解了,环境中无处不在的RNA酶,以及其容易被水解的特点啊,我们不得不尽快把珍贵的信使RNA转化成稳定的形式,于是就有...
下面将介绍RT-PCR实验的步骤。 材料准备 在进行RT-PCR实验之前,需要准备以下实验材料: 1.逆转录试剂盒:包括逆转录酶、引物、缓冲液等。 2.样品:需要包含RNA的样品,如细胞总RNA或组织RNA。 3.质控物:用于验证实验的阴性和阳性对照物。 4.相关试剂:如脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)、MgCl2、RNase抑制剂等。 逆转录反应...
1. 材料: - RNA样本:从不同组织或条件下提取的总RNA。 - RT-PCR试剂盒:包括逆转录酶、聚合酶、引物等。 - DNA分子量标记物:用于测定PCR产物的大小。 - 离心管、PCR管、PCR仪等实验器材。 2. 方法: (1)RNA提取:采用某种RNA提取试剂盒,按照说明书提取不同组织或条件下的总RNA。 (2)逆转录反应:将提取...
一、实验器具与材料: 1、移液枪:1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 2、吸头:1ml、200μl、20μl 3、匀浆管:5ml 4、吸头台:放置1ml吸头的一个,放置20μl吸头的一个 5、EP 管:1.5ml、0.2ml、100μl 6、试剂瓶:2个60ml的棕色试剂瓶(广口,带盖) ...
材料及试剂耗材 实验步骤 一、总RNA的提取 总RNA提取可以:(1)获得高纯度、高质量的总RNA;(2)可以满足生物学下游实验Northern Blot、核酸酶保护实验、RT-PCR、qRT-PCR 和阵列分析所需。 二、cDNA第一链的合成 目前试剂公司有多种cDNA第一链试剂盒出售,其原理基本相同,但操作步骤不一。现以GIBICOL公司提供的Supe...
Rt-PCR实验准备及与操作步骤 一、实验器具与材料: 1、移液枪:1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 2、吸头:1ml、200μl、20μl 3、匀浆管:5ml 4、吸头台:放置1ml吸头的一个,放置20μl吸头的一个 5、EP 管:1.5ml、0.2ml、100μl 6、试剂瓶:2个6...
RT-PCR实验所用器材等总结 Rt-PCR实验步骤 一、实验器具与材料: 1、移液枪:1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 2、吸头:1ml、200μl、20μl 3、匀浆管:5ml 4、吸头台:放置1ml吸头的一个,放置20μl吸头的一个 5、EP管:1.5ml、0.2ml、100μl...
本实验旨在通过RT-PCR方法分析目标基因在不同组织和条件下的表达情况,从而深入了解其功能和调控机制。 材料与方法: 1. 细胞或组织样本:选择不同类型的细胞或组织样本,如肝脏、肺、肌肉等。 2. RNA提取试剂盒:使用RNA提取试剂盒提取样本中的总RNA。 3. 逆转录试剂盒:使用逆转录试剂盒将RNA转录为cDNA。 4. PCR...
一、引言反转录巢式PCR( RT-nested PCR)是在反转录PCR的基础上发展起来的,在通过反转录获得cDNA的基础上,对目的基因进行巢式PCR扩增。它和简单的反转录PCR一样是用于检测某种RNA是否被表达,或者比较其相对表达水平,但是特异性更高、可靠性更强。通常用于拷贝数较低的RNA的扩增,种RNA是否被表达,或者比较其相对表达...