RT-PCR广泛应用于基因表达分析、病原体检测、克隆和基因功能研究等领域。 实验原理 逆转录: 逆转录酶将RNA模板转录成cDNA。 PCR扩增: 利用特定的引物对cDNA进行特异性扩增。 实验流程 1. 样本准备 收集样本,如细胞、组织或血液。 提取RNA,确保纯度和完整性。 2. 逆转录 设计并合成特异性的逆转录引物。 将RNA...
1.本实验大部分为RNA操作,注意RNA酶的污染。 2.RNase消化液消化未杂交的单链RNA和探针RNA,当探针与样品之间有碱基错配时,错配位点也将被消化,因此会产生片段较小的杂交片段。因此进行PCR时,采取尽量减少错配的措施。 3、 同位素对RNA合成有一定影响,有时会产生非全长的探针。因此,标记时间不宜过长。 4、 RN...
RT-PCR流程简介 一、抽提RNA: 1、防止RNA酶污染180℃的高温下干烤6hr以上;0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗;去污剂洗涤,双蒸水冲洗;溶液皆用0.1% DEPC水配置,试剂应为新开封或RNA专用;操作人员戴手套;器械专用。 2、材料的准备 组织及细胞最好为新鲜的,或者在-70℃条件下保存半年以下;尽量避免材料的冻融。 3...
RT-PCR实验方法总结大全 RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR。 要求: 1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng或1ug。 2.RT按要求做,一般不会出太大问题。 3.PCR,按常规。但如需扩长片段,则对前两步要求较高,需要有完整的cDNA存在,不是单改变Mg2+浓度、退火温度能...
1.实验前的准备 1.1实验器具的准备:RT-PCR所用的500μl和200μl薄壁EP管、移液器吸嘴最好用进口的,因为进口EP管、移液器吸嘴已经去除了RNasin,也已经灭菌处理过,可以直接用。实验前用干净的镊子夹取出EP管、移液器吸嘴插好备用,注意镊子不要碰到EP管内壁和吸嘴的尖部。如果用国产500μl和200μlEP...
RT-PCR 实验方法 TRIzol法抽提总RNA 细胞1×107 ↓ 加1mlTRIzol ↓ 用1ml加样器吹至液体澄清且无细胞团块 颠倒混匀10下,室温5分钟 ↓ 加氯仿1/5体积(0.2ml)(必须按总体积的1/5)↓ 颠倒混匀10下,室温5分钟 ↓ 4℃,离心12000g,15分钟 ↓ 转上层水相(约400μl)于另一1.5mlEP管...
随机引物需要在增加到60℃前在25℃保温10分钟。除了使用较高的逆转录温度外,还可以通过直接将RNA/引物混合物从65℃变性温度转到逆转录保温温度,并加入预热的2×的反应混合物提高特异性(cDNA热启动合成)。这种方法有助于防止较低温度时所发生的分子间碱基配对。...
【实验】普通PCR、荧光定量RT-qPCR、数字PCR的基本原理和操作方法,注意事项,SYBR GREEN, Taq Man探针, 视频播放量 9679、弹幕量 0、点赞数 378、投硬币枚数 117、收藏人数 1125、转发人数 85, 视频作者 植物百科, 作者简介 一个实验型up,偶尔猎奇。,相关视频:【实验】S