反相高效液相色谱RP-HPLC由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系，基于溶质在固定相和流动相之间的相互作用，是液相色谱的主要的分离模式，非极性固定相与溶质的非极性部分相互作用，而极性流动相则与溶质的极性部分相互作用，几乎可用于所有能溶于极性或弱极性溶剂中的有机物的分离。检测步骤通常包括样品准备...
rp-hplc名词解释rp-hplc名词解释 RP-HPLC(Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography)是一种高效液相色谱技术,它常被用来分离、测定和检测各种有机物和生物分子。该技术利用从非极性溶剂中到极性溶剂的差异进行分离,基于molecular recognition的作用机构,通过不断地调节溶剂组份的浓度,使有机溶剂与采样物料在...
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RP-HPLC的原理是基于溶剂在填料上的吸附和解吸作用。填料的极性决定了化合物在其上的吸附性能,而移动相的极性决定了化合物在填料上的解吸性能。在RP-HPLC中,填料的反相特性使得非极性和弱极性化合物更容易被吸附,并随后被分离。 RP-HPLC的步骤包括样品的预处理、色谱柱的平衡和实际的分离过程。首先,样品必须被准备...
多肽/蛋白质HPLC分析中的流动相选择有机溶剂可将吸附在疏水界面的蛋白质洗脱(如图1)。 在梯度洗脱期间,当有机溶剂量达到针对每一蛋白质的特定浓度时,蛋白质就会从疏水界面上解吸,继续顺着柱向下,从而从柱中…
多肽和蛋白质的反相色谱(RP-HPLC)分析法需要“离子对试剂”。 在流动相中加入离子对试剂,以实现良好的峰形。 目前认为,在没有离子对试剂的情况下,硅胶表面的金属杂质是导致蛋白质/多肽峰形较差的原因。 三氟…
RP-HPLC使用非极性的固定相(通常为C18或C8烷基链)填充在色谱柱中。样品在溶剂流动的影响下,与固定相发生相互作用,分离出来。在RP-HPLC中,极性的化合物会更快地溶解在溶剂中并通过流动,而非极性的分析物则会更容易与固定相发生相互作用,滞留时间较长。 应用: RP-HPLC广泛应用于化学、生物、制药、食品等领域的分...
在RP-HPLC中,对于可电离的化合物,流动相的pH会影响其电离状态从而改变其疏水性,进而影响其保留。在碱性化合物的反相分析中,当考虑用离子对方法时,需要确保化合物处于完全的质子化,也就是充分带上正电荷,这样才能和离液剂阴离子充分作用。在满足这个要求下,离液效应和pH关系不大。由于很多离液阴离子(如高氯酸根离...
RP-HPLC的原理是利用固定相为亲水性的填充柱，称为反相色谱柱。样品中的非极性或弱极性化合物会与反相柱上的亲水性固定相发生吸附，从而实现样品中化合物的分离。一般使用的反相填充固定相有C18、C8和C4等。RP-HPLC的仪器配置主要包括溶液调制系统、进样器、色谱柱、检测器和数据处理系统等。溶液调制系统负责溶解和...
RP-HPLC 是一种有效的多肽/蛋白纯化工具。通过RP-HPLC 法可以把粗品中的杂质分离得到目标多肽/蛋白。收集到的多肽、蛋白片段可以用于进一步研究,也可以作为治liao药物。 在蛋白/多肽分析过程中,色谱条件优化的目标是优化分辨率和保留时间。 制备色谱法分离蛋白/多肽时,色谱条件的开发主要是三个参数的优化(参见图1)。