在RP-HPLC中,有机相的类型经常可以影响选择性,而在添加离液剂的RP-HPLC中,有机相如甲醇、乙腈的影响甚至更加明显。如前面分析离液剂的机理提到,离液剂会吸附在固定相的表面,从而形成“准固定相(pseudo-stationary phase)”,从而让固定相带有了电荷,可以与带正电荷的分析物发生电荷作用。因此,离液剂在固定相上的吸附...
离液盐在RP-HPLC中非常重要的应用是增强碱性化合物的保留。据估计,现在大约有80%的药物分子中含有碱性官能团,但是由于其在RP-HPLC上的保留随流动相pH的变化太极端,且容易与硅胶基质色谱柱中残留硅醇作用而拖尾,因此这些化合物的RP-HPLC分析一直存在挑战性,而阴离子...
RP-HPLC的应用 | 多肽的分析与纯化⑤ 多肽和蛋白质的反相色谱(RP-HPLC)分析法需要“离子对试剂”。 在流动相中加入离子对试剂,以实现良好的峰形。 目前认为,在没有离子对试剂的情况下,硅胶表面的金属杂质是导致蛋白质/多肽峰形较差的原因。 三氟乙酸 三氟乙酸(TFA)是最常用的离子对试剂。将浓度为~0.1%的三...
反相高效液相色谱RP-HPLC由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系，基于溶质在固定相和流动相之间的相互作用，是液相色谱的主要的分离模式，非极性固定相与溶质的非极性部分相互作用，而极性流动相则与溶质的极性部分相互作用，几乎可用于所有能溶于极性或弱极性溶剂中的有机物的分离。检测步骤通常包括样品准备...
一、RP-HPLC原理 RP-HPLC利用不溶于水的固定相和溶于水的流动相之间的相互作用来实现物质的分离。常用的固定相是在硅胶或者其他基质上修饰了亲水基团(如羧基、氨基等)的聚合物,而流动相主要是有机溶剂和水的混合物。在RP-HPLC中,流动相中的有机溶剂比水含量高,因此被称为有机溶剂为主的流动相。 RP-HPLC的...
RP-HPLC使用非极性的固定相(通常为C18或C8烷基链)填充在色谱柱中。样品在溶剂流动的影响下,与固定相发生相互作用,分离出来。在RP-HPLC中,极性的化合物会更快地溶解在溶剂中并通过流动,而非极性的分析物则会更容易与固定相发生相互作用,滞留时间较长。 应用: RP-HPLC广泛应用于化学、生物、制药、食品等领域的分...
浅谈RP-HPLC中离子对试剂与离液剂的异同及应用 摘要 常规C18色谱柱的pH耐受范围为2-8,强酸性化合物的pKa一般小于2,强碱性化合物的pKa一般大于9,很难在常规C18上实现保留。抛开石墨碳色谱柱(pH耐受范围0~14)、HILIC色谱柱、离子交换色谱柱不谈,若要在常规C18上实现有效保留,对于强酸性化合物,可通过离子对色谱法...
反相高效液相色谱(RP-HPLC):结果与保留值之间的关系:利用RP-HPLC分离多肽首先得确定不同结构的多肽在柱上的保留情况。为了获得一系列的保留系数,Wilce等利用多线性回归方法对2106种肽的保留性质与结构进行分析,得出了不同氨基酸组成对保留系数影响的关系,其中极性氨基酸残基在2～20氨基酸组成的肽中,可减少在柱上的保留...
RP-HPLC是HPLC的一个部分。只不过占有比例较大。色谱：色谱又称色层法或层析法，是一种物理化学分析方法，它利用不同溶质（样品）与固定相和流动相之间的作用力（分配、吸附、离子交换等）的差别，当两相做相对移动时，各溶质在两相间进行多次平衡，使各溶质达到相互分离。
RP-HPLC通过使用疏水固定相和溶剂系统控制溶解度差异实现物质的分离。在RP-HPLC中,疏水固定相通常是含有C18链或者其他疏水性功能团的硅胶或化学键合硅胶,而样品则是通过疏水作用与固定相发生相互作用。当样品溶解度与固定相相比较大时,样品将与固定相更多地发生作用,分离效果更好。因此,RP-HPLC常用于疏水性化合物的分...