RP-HPLC通过使用疏水固定相和溶剂系统控制溶解度差异实现物质的分离。在RP-HPLC中,疏水固定相通常是含有C18链或者其他疏水性功能团的硅胶或化学键合硅胶,而样品则是通过疏水作用与固定相发生相互作用。当样品溶解度与固定相相比较大时,样品将与固定相更多地发生作用,分离效果更好。因此,RP-HPLC常用于疏水性化合物的分...
RP-HPLC的原理是基于溶剂在填料上的吸附和解吸作用。填料的极性决定了化合物在其上的吸附性能,而移动相的极性决定了化合物在填料上的解吸性能。在RP-HPLC中,填料的反相特性使得非极性和弱极性化合物更容易被吸附,并随后被分离。 RP-HPLC的步骤包括样品的预处理、色谱柱的平衡和实际的分离过程。首先,样品必须被准备...
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在RP-HPLC中,对于可电离的化合物,流动相的pH会影响其电离状态从而改变其疏水性,进而影响其保留。在碱性化合物的反相分析中,当考虑用离子对方法时,需要确保化合物处于完全的质子化,也就是充分带上正电荷,这样才能和离液剂阴离子充分作用。在满足这个要求下,离液效应和pH关系不大。由于很多离液阴离子(如高氯酸根离...
在RP-HPLC中,对于可电离的化合物,流动相的pH会影响其电离状态从而改变其疏水性,进而影响其保留。在碱性化合物的反相分析中,当考虑用离子对方法时,需要确保化合物处于完全的质子化,也就是充分带上正电荷,这样才能和离液剂阴离子充分作用。在满足这个要求下,离液效应和pH关系不大。由于很多离液阴离子(如高氯酸根离...
RP-HPLC的原理是利用固定相为亲水性的填充柱,称为反相色谱柱。样品中的非极性或弱极性化合物会与反相柱上的亲水性固定相发生吸附,从而实现样品中化合物的分离。一般使用的反相填充固定相有C18、C8和C4等。 RP-HPLC的仪器配置主要包括溶液调制系统、进样器、色谱柱、检测器和数据处理系统等。溶液调制系统负责溶解和...
HPLC RP法是基于样品与固定相之间的亲疏水性相互作用来进行物质分离的。常用的固定相是疏水性的烷基链,如C18。当样品溶液通过固定相时,极性物质会与固定相表面发生亲和作用,从而被滞留,而非极性物质则会较快地通过。通过调节流动相的成分和流速,可以实现对不同化合物的分离。 二、操作步骤 1. 样品制备:将待测物...
反相高效液相色谱(RP-HPLC):结果与保留值之间的关系:利用RP-HPLC分离多肽首先得确定不同结构的多肽在柱上的保留情况。为了获得一系列的保留系数,Wilce等利用多线性回归方法对2106种肽的保留性质与结构进行分析,得出了不同氨基酸组成对保留系数影响的关系,其中极性氨基酸残基在2～20氨基酸组成的肽中,可减少在柱上的保留...
RP-HPLC 是一种有效的多肽/蛋白纯化工具。通过RP-HPLC 法可以把粗品中的杂质分离得到目标多肽/蛋白。收集到的多肽、蛋白片段可以用于进一步研究,也可以作为治liao药物。 在蛋白/多肽分析过程中,色谱条件优化的目标是优化分辨率和保留时间。 制备色谱法分离蛋白/多肽时,色谱条件的开发主要是三个参数的优化(参见图1)...