DESeq2是目前最常用的差异分析R包。除了可以导入counts外,如果上游使用salmon,DESeq2官方还给出了直接导入tximport生成的txi对象的方法。counts与txi的获取见RNA-seq入门的简单实战(三):从featureCounts与Salmon输出文件获取counts矩阵 library(DESeq2) library("BiocParallel") #启用多核计算 ##构建dds DESeqDataSet i...
一、DESeq2、edgeR、limma的使用 强烈建议查看官方说明书进行这三种差异分析的学习,链接在文章末尾给出。 注意,这三个包都需要输入counts进行分析,不能用tpm、fpkm等归一化后的数据。 承接上节RNA-seq入门实战(三):在R里面整理表达量counts矩阵和RNA-seq入门实战(二):上游数据的比对计数——Hisat2+ featureCounts...
limma进行差异分析有两种方法 :limma-trend和voom,在样本测序深度相差不大时两种方法差距不大,而测序深度相差大时voom更有优势,因此我们一般都选择voom的方法进行差异分析。Limma-voom vs limma-trend (bioconductor.org) library(limma)library(edgeR)#分组矩阵design构建design<-model.matrix(~0+factor(group_list))#...
DESeq2是目前最常用的差异分析R包。除了可以导入counts外,如果上游使用salmon,DESeq2官方还给出了直接导入tximport生成的txi对象的方法。counts与txi的获取见RNA-seq入门实战(三):在R里面整理表达量counts矩阵和RNA-seq入门实战(二):上游数据的比对计数——Hisat2+ featureCounts 与 Salmon 代码语言:javascript 复制 l...
前提:对于基因芯片的差异表达分析而言,由于普遍认为其数据是服从正态分布,因此差异表达分析无非就是用t检验和或者方差分析应用到每一个基因上。高通量一次性找的基因多,于是就需要对多重试验进行矫正,控制假阳性。目前在基因芯片的分析用的最多的就是limma。
4.limma包做差异表达 5.DESeq2包做差异表达 6.比较三种包差异表达基因筛选结果 总结: 01 加载R包和输入数据 02 表达数据整理 对重复基因名取平均表达量,然后将基因名作为行名 去除低表达的基因 表达矩阵分组(癌症组织和癌旁组织) 03 edg...
DESeq2能够自动识别这些低表达量的基因的,所以使用DESeq2时无需手动过滤。 edgeR推荐根据CPM(count-per-million)值进行过滤,即原始reads count除以总reads数乘以1,000,000,使用此类计算方式时,如果不同样品之间存在某些基因的表达值极高或者极低,由于它们对细胞中分子总数的影响较大(也就是公式中的分母较大), 有...
后台发消息我这边不太好接收直接微信联系小助理哟感谢您的认可文章目录1. 加载R包和输入数据2. 表达数据整理3.edgeR包做差异表达4.limma包做差异表达5.DESeq2包做差异表达6.比较三种包差异表达基因筛选结果总结:01加载R包和输入数据02表达数据整理对重复基因名取平均表达量,然后将基因名作为行名去除低表达的基因表...
一般来说,我们在RNA-seq进行差异分析时最好使用Count值,因为limma-voom、edgeR和DESeq2都是针对RNA-seq的Count值分布进行假设,从而设计的软件。但是,在实际过程中,我们并不是总能获得其Count值,而经常得到的是FPKM或者TPM值,那对于这种情况,我们能不能使用类似于分析芯片的方法进行差异分析呢?
在进行多次假设检验时，需调整以控制假阳性率，DESeq2通过results函数自动完成这一步，采用Benjamini-Hochberg方法调整p值（即padj）。虽然limma最初设计用于处理芯片数据，亦适用于RNA-seq数据，尤其是通过voom转换计数数据以适应线性模型。获取差异表达基因列表后，可以进行功能富集分析，如GO或KEGG路径分析。