RNA免疫共沉淀—RIP-seq(RNA Immunoprecipititation)是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术,RIP利用目标蛋白的抗体将相应的RNA-蛋白复合物(RBP)沉淀下来,分离纯化捕获的RNA,结合高通量测序技术对目标RNA进行测序分析。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用,蛋白结合对象为RNA,RIP-seq即对富集得到的...
RIP-seq是将RNA免疫共沉淀(RNA Immunoprecipitation,RIP)与二代测序技术(NGS)相结合以研究细胞内RNA与蛋白互作的技术,RIP利用目标蛋白抗体把相应的RNA-蛋白复合物(RNA Binding Protein,RBP)沉淀下来,然后经过富集和纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行测序分析。 RIP-seq对富集得到的RNA片段通过高通量测序,在全转录组...
3、RIP Wash Buffer 、0.5M EDTA 、RNase Inhibitor 置于冰上 B.RNA结合蛋白免疫沉淀实验过程 1、准备 RIP Immunoprecipitation Buffer; 2、将前上步的 enpendoff 管放磁力架上,去上清,每管加入 900 μl RIP Immunoprecipitation Buffer; 3、迅速解冻第一步制备的细胞裂解液, 14,000 rpm ,4℃离心 10 min。吸...
将重悬的细胞在2500g的离心力下离心15分钟，以沉淀细胞核。随后，将细胞核沉淀重悬于新鲜的RIP缓冲液中。请注意，在整个过程中应使用不含RNA酶的试剂和工具，以确保RNA的完整性。0染色质剪切 将重悬后的细胞核分成两份，每份500μL，一份用于对照实验，另一份用于免疫沉淀。接着，使用匀浆器对染色质进行机械剪切...
答案是肯定的，即RNA免疫共沉淀（RNA Binding Protein Immunoprecipitation，RIP）技术。 在原理上，RIP与ChIP非常相似，可以理解为只是研究对象不同，RIP主要是研究蛋白-RNA间的互作情况。这些RNA可以是mRNA、非编码RNA甚至病毒RNA等。在实验方案和步骤上，RIP也有自身特别需要注意的地方，后面将会一一介绍。RIP实验可...
RIP产物既可以用qPCR检测已知RNA,也可以用二代测序检测未知RNA。 当没有合适的诱饵蛋白抗体时,可以通过表达融合了flag标签的诱饵蛋白,利用flag标签做免疫沉淀。即细胞过表达Flag-Bait,经裂解后与anti-Flag珠子孵育,诱饵融合蛋白与Beads结合,与诱饵融合蛋白互作的RNA“共沉淀”到Beads上,再经洗涤、洗脱后做qPCR或NGS...
这可以利用RIP技术，即RNA结合蛋白免疫沉淀法，通过针对目标蛋白的抗体将相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，经过纯化分离后，可以对复合物上的RNA进行qPCR验证或测序分析。RIP技术，即RNA结合蛋白免疫沉淀法，是研究细胞内RNA与蛋白质结合情况的重要手段，为揭示转录后调控网络的动态变化提供了有力支持。此外，还存在着其他...
RIP-seq是将RNA免疫共沉淀(RNA Immunoprecipitation,RIP)与二代测序技术(NGS)相结合以研究细胞内RNA与蛋白互作的技术,RIP利用目标蛋白抗体把相应的RNA-蛋白复合物(RNA Binding Protein,RBP)沉淀下来,然后经过富集和纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行测序分析。
RIP实验流程为: 1.在细胞样品中提取RNA结合蛋白与RNA。 2.用特异性抗体捕获目标蛋白。 3.用磁珠与抗体结合以形成免疫复合物。 4.通过磁力作用将免疫复合物沉淀到磁珠表面。 5.对磁珠进行洗脱,以去除不需要的杂质。 6.通过elution步骤将免疫复合物从磁珠中分离。 7.通过RT-PCR或qPCR检测以证明RNA结合蛋白与RNA的...