1 μM Obatoclax处理K1细胞24h后，GFP-RFP-LC3阳性自噬斑点显著增加；TEM观察表明(图B)，Obatoclax处理后，K1细胞出现与溶酶体共定位的自噬囊泡形成，并且损伤的溶酶体或大泡明显增加，间接表明Obatoclax中和了溶酶体。
在GFP-LC3的基础上，研究人员开发了GFP-RFP-LC3工具，红色荧光蛋白（RFP）在酸性环境中信号稳定。报告基因发出红色和绿色的荧光，图像重合时，自噬体将显示黄光。然而，在自噬溶酶体的酸性环境中，GFP荧光迅速淬灭，只留下红色荧光信号。诱导自噬后，黄光（表示更多的自噬体）和红光（表示更多的自噬体）增加。然而，...
(四)结果分析 mRFP-GFP-LC3串联荧光蛋白腺病毒中表达的GFP和mRFP用于标记及追踪LC3,GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体(由GFP荧光蛋白对酸性敏感,当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光,原理如下图所示)。 。 。 统计方法 SHAPE 我们在显微镜成像后红绿荧光merge后...
TagRFP-LC3 可识别从吞噬细胞到自噬体的自噬结构，在雷帕霉素处理的 MEFs 中DALGreen标记了61.8%的TagRFP-LC3点（自噬溶酶体阶段），其余的TagRFP-LC3点被认为是吞噬细胞和自噬体。DAPRed探针标记了65.7%的GFP-LC3点（吞噬体、自噬小体和自噬溶酶体）。其余的 GFP-LC3 点被认为是早期吞噬体。CQ（或 BafA1）...
方法 构建含 RFP-GFP-LC3 基因的慢病毒重组质粒载体,将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染 HEK293T 细胞,收集病毒上清后感染 RAW264. 7 细胞。经嘌呤霉素筛选获得稳定表达 RFP-GFP-LC3 的RAW264. 7 细胞株,用荧光显微镜和流式细胞术分析感染效率。饥饿处理稳定感染细胞,荧光显微镜下观察 RFP-GFP-LC3 斑点。结果 ...
方法构建含RFP-GFP-LC3基因的慢病毒重组质粒载体,将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,收集病毒上清后感染RAW264.7细胞。经嘌呤霉素筛选获得稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞株,用荧光显微镜和流式细胞术分析感染效率。饥饿处理稳定感染细胞,荧光显微镜下观察RFP-GFP-LC3斑点。结果成功构建了慢病毒p LV-CM...
无自噬时,RFP-GFP-hLC3融合蛋白弥散在胞浆中,在荧光显微镜下显示为黄色斑点;自噬形成时,由于自噬小体进入第二阶段后,与溶酶体进行融合,形成自噬溶酶体。自噬溶酶体由于溶酶体内部的酸性环境,可以导致PH下降,GFP淬灭,因此,GFP的减弱可指示自噬溶酶体形成的顺利程度,GFP越少,则从自噬小体到自噬溶酶体阶段流通得越...
技术交流|GFP-LC3或者 RFP- GFP-LC3质粒 请问万能的实验组有没有人有,可以馈赠一些吗😭😭🙏🏽🙏🏽🙏🏽🙏🏽🙏🏽汉恒的腺病毒很贵,孩子的组穷哭了 好久没上豆瓣了,下载回来碰碰运气😭
摘要:为了简便自噬相关机理药物在胰岛β细胞上的高通量筛选,实验通过慢病毒转染技术,将RFP-GFP-LC3质粒转入大鼠胰岛β细胞株(RIN-m5f),用G418对感染细胞进行筛选,激光共聚焦进行活细胞拍摄验证,得到100%表达RFP-GFP-LC3质粒的细胞株。无血清饥饿处理细胞,结果显示:饥饿组GFP/RFP荧光点比值较对照组下降,P62蛋白表达量...