qPCR实验步骤、结果分析、引物查找方法。不会引物设计也没关系啦 超好用的引物序列查找的几个网站,找到了记得用NCBI blast一下再用哦～ 1. RNA提取 (1)高速离心机预冷,75%乙醇提前配置并预冷,整个提取RNA的过程在冰盒上操作; (2)收集细胞,使用 PBS缓冲液洗两遍,每个样品加入1 mL Trizol裂解液,反复吹打,静置...
02:32 qPCR的原理 03:00 Qpcr的内参基因如何选择?参考资料 02:02 qPCR结果分析 - 扩增曲线 01:46 Qpcr结果分析-分析方法 04:01 Qpcr实验攻略①-体系配置及加样 02:42 Qpcr实验攻略(二)ABI 7500上机操作 04:12 你其实可以不用忍受痛经 科普大v教你轻松应对 05:38 qPCR数据处理及分析作图 待...
4、实战演练:QPCR数据分析与作图的完美结合 ①准备数据:整理你的QPCR实验数据,包括Ct值、样本信息、基因信息等。 ②数据处理和标准化:按照前面的方法进行数据处理和标准化。 ③数据可视化:选择合适的图表类型进行作图。比如,对于比较不同基因表达量的任务,可以使用柱状图;对于探究基因与生理指标之间关系的问题,可以使用...
上面的p53和GAPDH都有三个PCR孔,这叫做PCR重复,其作用是为了消除本次实验的操作误差。同样的,我们再重新种细胞,做qPCR实验,如此重复三次,则称为独立重复实验。而我们统计结果的时候需要统计的则是独立重复实验。 实验后,我们得到Ct值结果如下: Test1:...
最简单的方法就是看引物的溶解曲线是不是单峰。如果不是单峰,那么可能引物的特异性不太好,可能会出现非特异性扩增,从而影响实验结果。 引物特异性的解决方法: 更换引物 降低引物浓度 升高退火温度🌡️ 测试引物的扩增效率 📈 取一个样品,做浓度梯度稀释,一般是五六个浓度,然后用特异性引物跑qPCR。最后用CT值...
技术方法:ChIP-seq、RNA-seq、RT-qPCR等 作者通过对小鼠体细胞重编程过程中进行转录组和ChIP-seq等测序分析,揭示了H3K27me3去甲基化酶JMJD3与KLF4在体细胞重编程中协同调控转录新机制。首先,JMJD3对重编程有2方面相反的作用;在机制上,JMJD3被KLF4特异性地招募至上皮和多能性基因位点,并辅助KLF4激活这些基因。进...
原因分析:一般为实验操作问题导致 解决方法:将模板稀释后和上样;准确配置qPCR反应体系,充分混匀;定期校准qPCR仪器 2. NTC出现Ct值 NTC(无模板阴性对照)出现扩增一般会有两种情况: 2.1 NTC与目的基因孔的融解曲线峰不重叠。 原因分析:此情况下一般NTC的Tm值与目的基因的Tm值较低,主要是因为引物二聚体造成。
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由于qPCR是实时定量检测致病病原体基因核酸，因此它比化学发光、时间分辨、蛋白芯片等免疫学方法更具独到优势。存在问题 样本抑制物的影响 临床样本（如血液、粪便、组织等）和环境样本中可能含有各种抑制物，如血液中的血红蛋白、免疫球蛋白，粪便中的腐殖酸等。这些抑制物可能干扰 PCR 反应，降低酶的活性，从而影响...