今天就写一下定量数据的处理方法。 【进入主题】 基于相对定量 基于△△Ct法 【△△Ct法原理】这里我们只介绍△△Ct法,其特点是只依靠Ct值来计算结果,因此跑完qPCR之后的结果中除了Ct值外,其他数据几乎在后续分析和计算中是用不到的。但前提是目的基因和内参基因的扩增效率应基本一致。1、先来了解一下什么是Ct...
For example, 实验共设置三组:Control组、Treatment A 组、Treatment B 组,检测目的基因Bax的表达,使用36B4作为内参。 每组有5个样本,每个样本会同时检测Bax和36B4的表达量,同时需要两个复孔,也就是说共有5(样本数)*2(基因数)*2(复孔数)=20个孔 二、计算步骤 算出复孔平均值,即每个样本的Cq(Bax)、Cq...
数据整理:将qPCR仪器输出的原始数据(如Ct值、荧光强度等)整理成表格形式,便于后续分析。 数据筛选:去除异常值,如由操作失误或仪器故障引起的极端数据。 数据标准化:通过内参基因或对照样品对数据进行标准化处理,消除不同实验条件间的差异。 数据计算 相对表达量计算:利用ΔΔCt法或2^-ΔΔCt法计算目标基因的相对表...
定量数据处理方法的讨论，我们聚焦于△△Ct法这一广泛应用于qPCR数据处理的原理。△△Ct法的关键在于Ct值，它表示荧光信号达到阈值时的循环数，通常在第3-15个循环间设定基线，并据此计算模板起始拷贝数的对数关系。模板的Ct值越小，起始拷贝数越高；反之，Ct值越大，起始拷贝数越低。PCR循环在Ct值对...
审稿人提出希望用△Ct法处理，但是我们希望继续保留使用双标准曲线法，这样会更准确的描述不同组的差异。
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数据整理:将qPCR仪器输出的原始数据(如Ct值、荧光强度等)整理成表格形式,便于后续分析。 数据筛选:去除异常值,如由操作失误或仪器故障引起的极端数据。 数据标准化:通过内参基因或对照样品对数据进行标准化处理,消除不同实验条件间的差异。 数据计算 相对表达量计算:利用ΔΔCt法或2^-ΔΔCt法计算目标基因的相对表...
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