1️⃣ 准备全细胞裂解液作为 Input。 2️⃣ 进行 GST pull-down 实验,用 GST 或 His 抗体进行免疫沉淀。 3️⃣ 通过 SDS-PAGE 电泳分析洗脱结合物,验证蛋白间相互作用。🔍 结果解读关键点: ✅ Input 组:检测诱饵蛋白与靶蛋白的表达。 ✅ Pull-down 组:观察 GST 或 His 抗体免疫印迹后的条...
💡而pull-down则使用重组表达的诱饵蛋白,它通常是一个融合标签的重组蛋白,用来捕获与其互作的蛋白。🤔简单来说,IP主要捕获目的蛋白,Co-IP则能同时捕获目的蛋白和其互作蛋白,而pull-down则通过融合标签的重组蛋白来捕获互作蛋白。💡另外,如果你想知道蛋白是表达在上清还是包涵体中,可以通过观察超声碎菌后的菌液状...
GST pull-down:原核纯化蛋白与真核蛋白在试管内发生生化反应互作的结果,只要互作蛋白间具有相互结合的结构域基础即可实验证明。Co-IP实验:细胞内高表达目的蛋白,并通过IgG球珠-抗体-蛋白复合物体系,分离出互作的蛋白复合物,是细胞内的体内反应结合。太太太详细了!Co-IP实验全流程标准实操、结果解读及实验问题解决 (...
实验过程 GST-pull down 主要包括以下 3 部分：①利用基因重组技术构建带有 GST 标签的原核表②通过原核表达系统表达带有 GST 标签的融合蛋白；③利用 GST 亲和纯化柱进行蛋白纯化，获得高纯度的融合蛋白；再利用 GST 亲和纯化柱进行蛋白间的相互作用检测。实验结果 实验组GST-pull down第三列的实验结果可以看出KU-H...
影响GST pull down实验结果的因素 1、 载体选择 对于不同的实验需要构建的载体是不同的，载体的选择对融合蛋白有很大的影响，需要综合考虑表达融合蛋白的可溶性、能否被 IPTG 诱导表达、以及是否能够高质量表达。目前，经改造的pGEX 载体由于同时具备以上优点而广泛应用于构建 GST 融合蛋白。2、 诱导温度 不同温度下...
gstpulldown质谱分析结果，看哪个参数 在生物研究中，GST pull-down实验是一种常用的筛选和鉴定蛋白质间相互作用的技术。通过此项实验，我们可以将目标蛋白质与它可能的互作伙伴隔离，并进行进一步的分析，例如使用质谱技术进行蛋白质质谱鉴定。在解读GST pull-down质谱分析结果时，有几个重要的参数需要关注。一、谱图...
🔬 实验结果来啦!让我们一步步解读Pull Down技术的实验结果吧!1️⃣ WB预实验验证抗体质量 🧐 例如:图1展示了WB预实验的结果,可以看出抗体质量棒棒的,可以进行下一步的WB正式实验啦!2️⃣ 银染结果揭秘 🤩 例如:图2揭示了银染的神秘面纱,目的探针组有差异蛋白被拉出,这意味着我们可以进行后续的质谱...
🔍 GST-pull down实验是探索蛋白质间相互作用的重要方法,但进行时可能会遇到一些挑战。以下是针对常见问题的详细解答:1️⃣ 🤔 GST-pull down的优缺点是什么? 👍 高灵敏度、高特异性,且检测范围广泛,操作简单经济。 👎 但对于低含量抗原检测可能存在误差,且无法直接检测蛋白质结构和功能。2️⃣ 🤷...
pull-down流程和结果模板广州辉骏生物科技有限公司 Pull down 一、原理 Pull-down又叫做蛋白质体外结合实验,是在外源条件下检测蛋白质间相互作用的方法。基本原理:将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,充当“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的结合蛋白,洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳...
【文献阅读】| 读图 | RIP、ChIP、CoIP、RNA pull down到底是些啥?| 大分子间相互作用(一) 6585 3 33:22 App RIP试剂盒实验操作步骤 1.6万 62 58:18 App GST pull-down检测技术及应用研究 4324 1 3:00:07 App Pull-down+Co-IP+IP-MS大合集(11.19日下午培训) 6426 6 10:36 App GST pull do...