Pull-down实验是一种常用于研究蛋白质相互作用的技术,其基本原理及步骤如下: 实验原理 Pull-down实验的基本原理是利用蛋白质之间的特异性相互作用来筛选和鉴定与感兴趣蛋白相互作用的蛋白质。在实验中,首先将感兴趣的蛋白质(通常是已知的蛋白质)与特定的标签(如GST、HIS等)融合,并表达在宿主细胞中。然后,将这些标...
磁架(Magnetic rack):作用:用于分离磁珠,利用磁场将磁珠与溶液中的其他成分分离开来,方便去除上清液或进行洗涤步骤。 质谱(Mass spectrometry)或Western blot(WB):作用:用于分析DNA-蛋白复合物的成分。质谱可以识别目标蛋白,Western blot可以进一步验证目标蛋白是否存在于复合物中。 这些组分的协调作用使得DNA pull-down实...
(2)蛋白质Pull-down的主要步骤 ①GST融合蛋白先与下列蛋白溶液之一孵育,包括:a.单一明确的重组蛋白;b.细胞裂解蛋白混合液;c.体外翻译cDNA表达得到的未知蛋白。 ②混合液与谷胱甘肽琼脂糖球珠在4℃反应2h,离心得沉淀。 ③沉淀加入Loading Buffer煮沸3min,高速离心,取上清液进行SDS-PAGE电泳。 ④考马斯亮蓝对SDS-PAG...
（5）用脱色液进行脱色至无背景。3.4 Pull Down （1）安装柱子，用PBS平衡柱子（加入使其自然流下）（2）加入2 mL GST-A到一个封闭的GST柱子,4℃ rotate混匀6 h。（3）将孵育液流出后（收F1），用已预冷的300 mL 1×PBS洗涤GST柱子约20次（6ml加入后上下盖子盖好颠倒混匀，打开流出），4℃；（流出...
Pull down实验步骤 一、Pull down实验特点 Pull down实验是一种广泛用于检测或确认多种蛋白质之间相互作用的体外方法[1]。该方法类似于免疫共沉淀实验,使用亲和配体捕获相互作用蛋白。这两种方法的不同之处在于,…
pull-down实验步骤解析 嘿,咱今儿就来好好唠唠这pull-down实验步骤哈! 你想想,这pull-down实验就像是一场精心编排的舞蹈。首先呢,得准备好“舞台”,也就是把咱要研究的蛋白啥的都准备得妥妥当当。这就好比跳舞得先有合适的场地和舞者呀!然后呢,把带有“钩子”的东西,也就是能和目标蛋白结合的东西放进去,这...
步骤详解:RNA pull-down实验这么做,不走弯路! RNA pull-down实验简介,实验原理、流程图、操作方法,常见问题,通通帮你搞定!实验室小白和大神都看过来~ #实验 #科普 #技术 #RNA #青少年课外知识讲堂 - 小金博士于20240329发布在抖音,已经收获了3076个喜欢,来抖音,
pull-down⽅法步骤汇总 GST-Pull down:1) 利⽤纯化好的蛋⽩进⾏GST-Pull down 实验操作。2) 实验设置2 个组合，第⼀个是实验组(90 µl BP-His +90 µl BRM (689-952aa)-GST)，第⼆个是负对照组(90 µl BP-His + 10 µl GST)，分别在1.5 ml 的离⼼管中混合均匀。3) 加...
而Pull-Down所获得的捕获蛋白的分析方式，如下图所示：Pull-Down与蛋白纯化实验的对比：运用重组基因表达蛋白，再进行下游的蛋白的提取和纯化实验：两种实验步骤的异同点解析：需要实验到的产品类型：GST 标签蛋白纯化——PurKine™ 谷胱甘肽S转移酶标签 谷胱甘肽树脂MBP 标签蛋白纯化——PurKine™ 麦芽糖结合蛋白标签...
5. RNA pull-down实验所需主要成分和试剂 6. 常见问题及解答 1. RNA pull-down的原理 RNApull-down是研究细胞内RNA与蛋⽩/RNA结合情况的技术。先将RNA进⾏标记 (如⽣物素标记),再与细胞裂解液共同孵育,从⽽形成RNA-RNA/蛋⽩质复合物,进 ⽽检测与之结合的RNA或蛋⽩质。复合物洗脱后,通过荧光...