一、GST Pull-down Pull down技术是通过固定一种诱饵蛋白来特异性吸附配体蛋白,以达到富集、分离、纯化某种配体蛋白的目的。为了更有效地利用Pull down技术,1988年,Smith等人利用GST融合标签从细菌中纯化出GST融合蛋白(Smith et al., 1988),将已知蛋白以融合蛋白的形式表达,亲和固化在GSH亲和树脂上,作为一种“诱饵蛋...
DNA拉下实验（DNA Pull-down）是体外研究DNA与蛋白互作的有效方法，可以探究DNA与转录调控蛋白质的互作，最常见的应用是验证启动子与转录因子的互作情况。DNA Pull-down原理 将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上，形成磁珠-DNA探针复合体，再与细胞核蛋白孵育，这可以将与DNA结合的蛋白吸附在磁珠上。洗涤去...
下拉实验(pull-down assay)是验证体外蛋白互作的主要方式,也是验证没有成熟抗体的蛋白互作的方式之一。通过体外表达亲和蛋白-GST,将亲和蛋白固化在谷胱甘肽亲和树脂上充当“诱饵蛋白”,将细胞或者组织的总蛋白和此“诱导蛋白”混合孵育后可从中捕获“目标蛋白”,最后通过洗脱的方式将“目标蛋白”洗脱后检测,就可以分析蛋...
拉下实验（Pull-down）的优点 1、鉴定的蛋白是直接作用的蛋白，非间接作用的复合体；2、GST标记可把一些难溶蛋白变成可溶蛋白，使实验变得更易操作；3、GSH谷胱甘肽偶联球珠亲和力强，洗脱纯度高。拉下实验（Pull-down）的缺点 1、两个非同一定位的蛋白可能因电荷或是强亲和力的原因造成假阳性，需用其他方法再次验证...
二、DNA Pull-down DNA pull-down是一种新颖的体外研究DNA与蛋白互作的实验技术。该技术以研究的DNA序列为探针,寻找与该序列结合的蛋白质,最常见的应用是寻找某个或者某些特定基因启动子区域的转录因子/组蛋白。 基本原理: 针对目标区域体外制备脱硫生物素标记的特异性DNA探针,使其与待测蛋白液孵育,可与偶联在磁珠...
④GST-pull down实验； ⑤Western Blot检测目的蛋白； ⑥拍照记录实验结果。▲ GST-pull down实验流程图 GST下拉实验结果展示 GST下拉实验技术服务范畴：验证两个已知蛋白质间的相互作用 技术服务优势： ①团队经验丰富； ②交付周期短，提供原始图片，保证数据真实可靠。
本次实验的目的是使用RNA-Pull down-MS或者RNA-Pull down-WB的方法,通过体外转录法标记生物素RNA探针,在目的细胞中通过目的探针把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,经过分离纯化并对结合在复合物上的蛋白进行MS或WB分析,寻找目的RNA的靶标蛋白,或在不同遗传背景或处理条件下的互作变化。广州基云生物拥有资深的项目管理...
▲ GST下拉实验(GST-pull down)技术原理示意图 GST下拉实验原理简介 GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术,可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST(谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase)融合,使其与谷胱甘肽亲和树脂结合,然后在目的蛋白溶液过柱时,便可从中捕获与靶蛋白...
Pull-Down旨在证明两种蛋白质之间的相互作用或探索可与目的蛋白结合的未知蛋白或分子。Pull-Down不同于IP或Co-IP之处在于,它不是基于抗体-抗原相互作用,不是免疫反应。诱饵蛋白(或配体),通过非抗体亲和系统固定到固相支持物上,这种固定可以通过共价偶联结合到活化的微珠上,也可以通过与支持物上的受体分子结合的亲和...
【文献阅读】| 读图 | RIP、ChIP、CoIP、RNA pull down到底是些啥?| 大分子间相互作用(一) 6585 3 33:22 App RIP试剂盒实验操作步骤 1.6万 62 58:18 App GST pull-down检测技术及应用研究 4324 1 3:00:07 App Pull-down+Co-IP+IP-MS大合集(11.19日下午培训) 6426 6 10:36 App GST pull do...