Pull-down实验,又称拉下实验,是一种体外亲和纯化技术。(这个实验跟免疫共沉淀实验很像,不同的是免疫共沉淀是在细胞里进行的。)一、原理:将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的...
Pull down实验,又称拉下实验,是一种体外亲和纯化技术,蛋白Pull down技术可以提供一种诱饵蛋白来特异性识别配体蛋白质,以达到富集、分离、纯化某种配体蛋白质的目的,是体外研究蛋白与蛋白相互作用的有力工具。蛋白质Pull down将被亲和试剂标签(如谷胱甘肽-S-转移酶、组氨酸六肽、生物素)标记的诱饵蛋白固定在某种固体基...
pull-down 实验,即下拉实验,也称为体外蛋白结合实验,用以验证蛋白和蛋白间的互作关系,同时也可以某一蛋白为诱饵,钓取与诱饵蛋白存在相互作用的未知蛋白。 而小分子 pull-down则是在pull-down的基础上,通过化学合成的方法将活性小分子进行修饰,连接上报告分子(如生物素),制备成小分子探针,通过探针分子上的报告分子(...
Pull - down 实验是一种用于研究蛋白质 - 蛋白质相互作用或蛋白质 - 小分子(如核酸、肽段等)相互作用的体外实验技术。它可以验证两个或多个生物分子之间是否存在直接的相互作用关系。通常会将一个已知的蛋白(称为诱饵蛋白)融合表达带有亲和标签(如谷胱甘肽 - S - 转移酶 - GST、组氨酸标签 - His - tag ...
下拉实验(pull-down assay)是验证体外蛋白互作的主要方式,也是验证没有成熟抗体的蛋白互作的方式之一。通过体外表达亲和蛋白-GST,将亲和蛋白固化在谷胱甘肽亲和树脂上充当“诱饵蛋白”,将细胞或者组织的总蛋白和此“诱导蛋白”混合孵育后可从中捕获“目标蛋白”,最后通过洗脱的方式将“目标蛋白”洗脱后检测,就可以...
拉下实验又叫做蛋白质体外结合实验(binding assay in vitro),是一种在试管法。简介 拉下实验(Pull-down assay)该实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,近年来越来越受到广大学者的喜爱。其基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“...
二、DNA Pull-down DNA pull-down是一种新颖的体外研究DNA与蛋白互作的实验技术。该技术以研究的DNA序列为探针,寻找与该序列结合的蛋白质,最常见的应用是寻找某个或者某些特定基因启动子区域的转录因子/组蛋白。 基本原理: 针对目标区域体外制备脱硫生物素标记的特异性DNA探针,使其与待测蛋白液孵育,可与偶联在磁珠...
Pull-down 技术又称蛋白质体外结合实验(Binding assay in vitro), 是一种行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,可用于初步研究两种蛋白质互作分析。Co-IP和Pull-down 均可用于检测蛋白相互作用,两者有很多相似之处,包括均能检测两种蛋白质之间强相互作用,但均只能进行定性分析而不能检测瞬时相互作用,...