GST pull down(GST融合蛋白沉降技术)是体外检测蛋白相互作用的常用方法,一般来说,GST融合蛋白pull down方法用于两个方面:一是鉴定能与已知融合蛋白相互作用的未知蛋白质;二是鉴定两个已知蛋白质之间是否存在相互作用。为排除假阳性所设的一组对照实验是在没有诱饵蛋白存在的条件下,将样品结合到GST上。该对照可以是表...
DNA pull-down实验首先针对靶标区域设计特异性DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合;纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体,经过洗涤可...
图1 GST Pull-down验证蛋白互作原理图。 操作步骤: 样品处理—GST/His-诱饵蛋白原核表达载体构建—GST融合蛋白表达—GST融合蛋白纯化—Pull-down捕获猎物蛋白—SDS-PAGE电泳—Western blot或LC-MS/MS 二、DNA Pull-down DNA pull-down是一种新颖的体外研究DNA与蛋白互作的实验技术。该技术以研究的DNA序列为探针,寻...
DNA pull-down实验首先针对靶标区域设计特异性DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合;纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体,经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除;最后,经洗脱液洗脱,得到目的DNA探针-蛋白质复合物,再...
▲ GST下拉实验（GST-pull down）技术原理示意图 GST下拉实验原理简介 GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术，可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST（谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase）融合，使其与谷胱甘肽亲和树脂结合，然后在目的蛋白溶液过柱时，便可从中捕获与...
▲ GST下拉实验(GST-pull down)技术原理示意图 GST下拉实验原理简介 GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术,可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST(谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione-Stransferase)融合,使其与谷胱甘肽亲和树脂结合,然后在目的蛋白溶液过柱时,便可从中捕获与靶蛋白...
图2 DNA Pull-down示意图(Aranda S et al., 2020)。 操作步骤: 样品处理—探针标记—蛋白与探针共孵育—Western blot或LC-MS/MS检测 DNA Pull-down的优点: 1、可富集分析低丰度蛋白; 2、探针制备简便,周期短; 3、获得特异性蛋白与下游蛋白质检测技术兼容。
DNA pull-down是体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。体外制备生物素标记的靶DNA系列,使其与待测蛋白液孵育,形成“生物素化DNA-蛋白质”复合物。由于生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用之间,因此采用链霉亲和素磁珠将靶DNA及其结合蛋白从待测蛋白液
而Pull-Down所获得的捕获蛋白的分析方式，如下图所示：Pull-Down与蛋白纯化实验的对比：运用重组基因表达蛋白，再进行下游的蛋白的提取和纯化实验：两种实验步骤的异同点解析：需要实验到的产品类型：GST 标签蛋白纯化——PurKine™ 谷胱甘肽S转移酶标签 谷胱甘肽树脂MBP 标签蛋白纯化——PurKine™ 麦芽糖结合蛋白标签...
Pull - down 实验 Pull - down 实验是一种用于研究蛋白质 - 蛋白质相互作用或蛋白质 - 小分子（如核酸、肽段等）相互作用的体外实验技术。它可以验证两个或多个生物分子之间是否存在直接的相互作用关系。通常会将一个已知的蛋白（称为诱饵蛋白）融合表达带有亲和标签（如谷胱甘肽 - S - 转移酶 - GST、组氨酸...