GST-pull down 主要包括以下 3 部分：①利用基因重组技术构建带有 GST 标签的原核表②通过原核表达系统表达带有 GST 标签的融合蛋白；③利用 GST 亲和纯化柱进行蛋白纯化，获得高纯度的融合蛋白；再利用 GST 亲和纯化柱进行蛋白间的相互作用检测。实验结果 实验组GST-pull down第三列的实验结果可以看出KU-HIS，GST的...
DNA pull-down实验首先针对靶标区域设计特异性DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合;纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体,经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除;最后,经洗脱液洗脱,得到目的DNA探针-蛋白质复合物,再...
下拉实验（pull-down assay）是验证体外蛋白互作的主要方式，也是验证没有成熟抗体的蛋白互作的方式之一。通过体外表达亲和蛋白-GST，将亲和蛋白固化在谷胱甘肽亲和树脂上充当“诱饵蛋白”，将细胞或者组织的总蛋白和此“诱导蛋白”混合孵育后可从中捕获“目标蛋白”，最后通过洗脱的方式将“目标蛋白”洗脱后检测，就可以...
1.验证实验条件: 在解读 pull down 实验结果之前,首先要确保实验条件的可靠性和重复性。这包括使用合适的阳性和阴性对照样品,确保实验操作的一致性,并进行重复实验以验证结果的可重复性。 2.分析实验结果: pull down 实验的结果通常是通过蛋白质分析技术(如免疫印迹、质谱分析等)得到的。根据实验设计和目的,可以使用...
Pull-Down与蛋白纯化实验的对比：运用重组基因表达蛋白，再进行下游的蛋白的提取和纯化实验：两种实验步骤的异同点解析：需要实验到的产品类型：GST 标签蛋白纯化——PurKine™ 谷胱甘肽S转移酶标签 谷胱甘肽树脂MBP 标签蛋白纯化——PurKine™ 麦芽糖结合蛋白标签 糊精树脂（6%交联）Flag 标签蛋白纯化——PurKine™ ...
1 Control Pull-down溶液 Ovis aries 2 sample Pull-down溶液 Ovis aries (2)检测过程 略 (3)检测结果 样品名称 Control sample 差异蛋白 Protein Group 230 327 132 7、生物信息学分析 针对实验组扣除对照组后的132个差异蛋白进行生物信息学分析(GO、KEGG pathway、String)。 (1)GO分析 根据分类结果,对包含目...
pull-down实验步骤解析 嘿,咱今儿就来好好唠唠这pull-down实验步骤哈! 你想想,这pull-down实验就像是一场精心编排的舞蹈。首先呢,得准备好“舞台”,也就是把咱要研究的蛋白啥的都准备得妥妥当当。这就好比跳舞得先有合适的场地和舞者呀!然后呢,把带有“钩子”的东西,也就是能和目标蛋白结合的东西放进去,这...
Pull down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系,从体外转录或翻译体系中检测出蛋白相互作用关系。RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA pull down是使用体外转录法标记生物素RNA探针,然...
RNA Pull-down技术实验流程主要包括以下几个步骤：（1）构建含目的基因序列质粒：选择自己感兴趣的基因，根据其序列用同源重组方式或全基因合成构建含目的基因序列质粒；并测序验证序列准确性，并提取含目的基因序列质粒备用；（2）转录模板的获取：T7 RNA聚合酶特异性识别来自T7噬菌体的启动子序列。为了使T7 RNA聚合...