pulldown实验是一种常用的蛋白质与DNA相互作用研究方法。该实验利用亲和层析技术,通过特定蛋白质结合域与DNA结合的特异性相互作用,将蛋白质-DNA复合物富集和纯化出来。实验步骤包括准备工作、细胞裂解、富集DNA-DNA结合复合物、分离复合物以及分析复合物等。通过pulldown实验,可以更深入地了解蛋白质与DNA的相互作用机制。
其基本原理是利用蛋白质之间的特异性相互作用来筛选和鉴定与感兴趣蛋白相互作用的蛋白质。在实验中,首先将感兴趣的蛋白质(通常是已知的蛋白质)与特定的标签(如GST、HIS等)融合,并表达在宿主细胞中。然后,将这些标记蛋白与细胞提取物或重组蛋白混合,使它们在体外环境中进行相互作用。 在混合过程中,与标记蛋白质相互...
至于步骤嘛,首先是构建载体和融合蛋白的表达,选择合适的表达载体,把感兴趣的蛋白质标记上。然后就是细胞破碎与收集,把细胞里的蛋白质都提取出来。接着就是蛋白质大规模培养及纯化,把咱们感兴趣的蛋白质纯化出来。最后就是Pull-down实验的进行啦,把纯化出来的蛋白质固定到柱子上,然后加入其他的蛋白质,看看哪些会跟它...
①构建表达载体：目的基因克隆或目的基因合成；限制性内切酶酶切骨架载体并纯化；目的基因插入骨架载体；转化大肠杆菌，筛选阳性克隆并测序鉴定； ②转化表达菌株：将目的表达载体转化表达菌株； ③制备目的蛋白：诱导目的蛋白表达并提取目的蛋白； ④GST-pull down实验； ⑤Western Blot检测目的蛋...
pull down实验原理 pull down 实验原理 拉使实验是用来测量不同气体中电子的阻力和电位的常见实验。它涉 及一个电路,其中有一个可变电阻,一个保护电阻,一个可变电压的电源 和一个探头。它的目的是测量一定的电压到一个指定的气体里,这个电压 上升或是下降来测量电子的阻力。拉使实验在物理和化学实验室里非常常 ...
研究者使用生物素标记的LINC01503正义或反义序列进行RNApull down实验,然后进行质谱分析鉴定与LINC01503相互作用的蛋白(图3B)。结果表明,剪接因子SFPQ是高度富集的蛋白之一(图3C)。为进一步验证LINC01503与SFPQ之间的相互作用,研究者用抗SFPQ抗体进行了RIP实验,发现LINC01503 RNA明显富集(图3D),敲除LINC01503后LINC01503...
蛋白互作之GST pull down实验原理及步骤展示 原理简介 GST-pull down 技术是一种在体外验证蛋白质相互作用的试验技术,可用来进一步验证酵母双杂交的结果。将靶蛋白与 GST(谷胱苷肽巯基转移酶, Glutathione...