总之,针对RNA Pull Down实验中可能出现的问题,需要仔细分析并采取相应的措施进行解决。同时,在实验过程中注意规范操作,提高实验的可重复性和可靠性。 相关产品
⑤ 切掉标签,洗脱得到相互作用的蛋白。影响GST pull down实验结果的因素 1、 载体选择 对于不同的实验需要构建的载体是不同的,载体的选择对融合蛋白有很大的影响,需要综合考虑表达融合蛋白的可溶性、能否被 IPTG 诱导表达、以及是否能够高质量表达。目前,经改造的pGEX 载体由于同时具备以上优点而广泛应用于构建 GST...
3.DNA和RNA对实验结果的影响 有研究在利用GST pull-down检测蛋白间是否存在相互作用关系时,对阳性结果进一步探究发现,两种蛋白均为DNA结合蛋白,两者相互作用是两种蛋白分别与DNA结合所致。因此,在做pull-down实验时,可加入核酸酶来消除可能桥接到蛋白上的DNA和RNA,减少蛋白间相互作用出现的假阳性。Detaibio GST p...
5. RNA pull-down实验所需主要成分和试剂 6. 常见问题及解答 1. RNA pull-down的原理 RNApull-down是研究细胞内RNA与蛋⽩/RNA结合情况的技术。先将RNA进⾏标记 (如⽣物素标记),再与细胞裂解液共同孵育,从⽽形成RNA-RNA/蛋⽩质复合物,进 ⽽检测与之结合的RNA或蛋⽩质。复合物洗脱后,通过荧光...
1、实验前期准备 (1)首先是样本的收集和处理,如果样本是细胞,要考虑细胞中该RNA的表达量,如果RNA含量较低,那提取出来的RBP可想而知会非常少, 建议大家提前准备较多的细胞。( 本人的试剂盒要求的量是107个细胞,实验操作时使用了8个10 cm大皿。)也看到很多小伙伴说可以先进行过表达该RNA后再进行pull-down实验,...
GST pull down(GST融合蛋白沉降技术)是体外检测蛋白相互作用的常用方法,一般来说,GST融合蛋白pull down方法用于两个方面:一是鉴定能与已知融合蛋白相互作用的未知蛋白质;二是鉴定两个已知蛋白质之间是否存在相互作用。为排除假阳性所设的一组对照实验是在没有诱饵蛋白存在的条件下,将样品结合到GST上。该对照可以是表...
在清楚知道操作流程的前提下,弄清楚图中各个部分所代表的实验步骤,结合图中展示的结果进行分析,便可以看懂实验结果图。 文献案例1 结果解读 作者在GST的N端融合Sw-5b蛋白,在NSm21蛋白添加YFP标签便于免疫印迹。 GST pull-down+YFP IB组:表示GST pull-down实验后用YFP进行免疫印迹。发现GST + NSm21-YFP组和GST...
一、RNA pull down的实验原理是什么?为什么要做RNA pull down? RNA pull down使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过wester...
步骤详解:RNA pull-down实验这么做,不走弯路! RNA pull-down实验简介,实验原理、流程图、操作方法,常见问题,通通帮你搞定!实验室小白和大神都看过来~ #实验 #科普 #技术 #RNA #青少年课外知识讲堂 - 小金博士于20240329发布在抖音,已经收获了3076个喜欢,来抖音,
RNA pull- down实验常见问题问题1:RNA 降解 可能原因:1)无核酸酶的环境被破坏 2)体外转录的RNA探针降解 解决办法:1)清洗和使用新开的离心管和试剂等 2)RNA探针合成后,电泳检测其长度和浓度 问题2:RNA结合蛋白的亲和力不够: 可能原因:1)结合缓冲环境没有优化 2)裂解不完全 3)磁珠用量不足 4)RNA探针用量不...